烟草中一个ltr类反转录转座子基因的克隆与-南京农业大学学报.pdf

－ 　 南京农业大学学报　 ２０１５ꎬ３８(６):９３６ ９４２ ｈｔｔｐ:/ / ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ － 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｏｉ:１０.７６８５/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００ ２０３０.２０１５.０６.０１０ － 郭玉双ꎬ陈静ꎬ刘筱嘉ꎬ等. 烟草中一个ＬＴＲ类反转录转座子基因的克隆与功能分析[Ｊ]. 南京农业大学学报ꎬ２０１５ꎬ３８(６):９３６ ９４２ 烟草中一个ＬＴＲ类反转录转座子基因的克隆与功能分析 １ ２ ３ １ １ １ １ １ １ １ １∗ 郭玉双 ꎬ陈静 ꎬ刘筱嘉 ꎬ余世洲 ꎬ余婧 ꎬ林世锋 ꎬ邹颉 ꎬ付强 ꎬ张孝廉 ꎬ赵杰宏 ꎬ任学良 (１.烟草行业分子遗传重点实验室/ 贵州省烟草科学研究院ꎬ贵州 贵阳５５００８１ꎻ２.遵义医学院生化 与分子生物学教研室ꎬ贵州 遵义 ５６３００９ꎻ３.番禺出入境检验检疫局ꎬ广东 番禺５１０００６) 摘要:[目的]分析烟草中ＬＴＲ类反转录转座子对植物生长发育的影响ꎮ [方法]利用同源克隆及 ＲＡＣＥ 的方法ꎬ从烟草栽 培品种‘贵烟 １号’ｃＤＮＡ 中克隆得到了 １个烟草反转录转座子的全长 ｃＤＮＡ 序列ꎬ命名为 Ｎｔｒｔ１(ＧｅｎＢａｎｋ 登录号: ＫＣ８９９０７７)ꎮ 利用实时定量ＲＴ￣ＰＣＲ研究了该基因在烟草不同组织中的表达水平ꎻ构建了基于双生病毒卫星诱导的Ｎｔｒｔ１ 的基因沉默载体ꎬ以中国番茄黄化曲叶病毒(ｔｏｍａｔｏ ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ Ｃｈｉｎａ ｖｉｒｕｓꎬＴＹＬＣＣＮＶ)为辅助病毒在烟草中沉默了该基 因ꎬ并调查了基因沉默后的表型ꎮ [结果]序列分析表明:该基因全长５０４６ ｂｐꎬ编码３个ＯＲＦꎬ分别为Ｇａｇ/ ｐｏｌ多聚蛋白、反 转录转座子的中心蛋白以及一个整合酶ꎮ 该基因能在烟草的根、茎、叶中表达ꎬ在叶片中的表达量最高ꎮ Ｎｔｒｔ１基因沉默烟 草与对照相比ꎬ烟草植株明显变矮ꎮ [结论]Ｎｔｒｔ１在烟草的生长发育中具有重要作用ꎮ 关键词:ＬＴＲ类反转录转座子ꎻＲＡＣＥꎻ病毒介导的基因沉默 － － － 中图分类号:Ｑ９４３.２　 　 　 　 文献标志码:Ａ　 　 　 　 文章编号:１０００ ２０３０(２０１５)０６ ０９３６ ０７ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ ＬＴＲ￣ｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ(Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ) １ ２ ３ １ １ １ ＧＵＯ Ｙｕｓｈｕａｎｇ ꎬＣＨＥＮＪｉｎｇ ꎬＬＩＵ Ｘｉａｏｊｉａ ꎬＹＵ Ｓｈｉｚｈｏｕ ꎬＹＵＪｉｎｇ ꎬＬＩＮ Ｓｈｉｆｅｎｇ ꎬ