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三代遗传标记 分子标记是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种较为理想的遗传标记形式,它以蛋白质、核酸分子的突变为基础,检测生物遗传结构与其变异。分子标记技术从本质上讲,都是以检测生物个体在基因或基因型上所产生的变异来反映生物个体之间的差异。每一种分子标记都有其自身的特点和特定的应用范围,但就一般意义而言,DNA 分子标记与形态标记和生化标记等相比,具有许多独特的优点: ①不受组织类别、发育阶段等影响。植株的任何组织在任何发育时期均可用于分析。②不受环境影响。因为环境只影响 HYPERLINK /s?wd=%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E8%A1%A8%E8%BE%BEtncprfenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1Ydmvc3P1DdP1wWP1w9mH-W0ZwV5Hcvrjm3rH6sPfKWUMw85HfYnjn4nH6sgvPsT6KdThsqpZwYTjCEQLGCpyw9Uz4Bmy-bIi4WUvYETgN-TLwGUv3EnW0vP1T3nWmk \t _blank 基因表达(转录与翻译) ,而不改变 HYPERLINK /s?wd=%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%BB%93%E6%9E%84tncprfenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1Ydmvc3P1DdP1wWP1w9mH-W0ZwV5Hcvrjm3rH6sPfKWUMw85HfYnjn4nH6sgvPsT6KdThsqpZwYTjCEQLGCpyw9Uz4Bmy-bIi4WUvYETgN-TLwGUv3EnW0vP1T3nWmk \t _blank 基因结构即DNA 的核苷酸序列。③标记数量多,遍及整个基因组。④多态性高,自然存在许多等位变异。⑤有许多标记表现为共显性,能够鉴别纯合基因型和杂合基因型, 提供完整的遗传信息。⑥DNA 分子标记技术简单、快速、易于自动化。⑦提取的DNA 样品,在适宜条件下可长期保存,这对于进行追溯性或仲裁性鉴定非常有利。因此,DNA 分子标记可以弥补和克服在形态学鉴定及同工酶、蛋白电泳鉴定中的许多缺陷和难题,因而在品种鉴定方面展示了广阔的应用前景。 　　1. 1 ?第1 代分子标记 　　1.1. 1 ?RFLP 标记技术。 ? ? ? ?1980 年Botesin提出的限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphisms ,RFLP) 可以作为遗传标记,开创了直接应用DNA 多态性的新阶段,是最早应用的分子标记技术 。RFLP 是检测DNA 在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA 片段的大小,反映DNA 分子上不同 HYPERLINK /s?wd=%E9%85%B6%E5%88%87%E4%BD%8D%E7%82%B9tncprfenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1Ydmvc3P1DdP1wWP1w9mH-W0ZwV5Hcvrjm3rH6sPfKWUMw85HfYnjn4nH6sgvPsT6KdThsqpZwYTjCEQLGCpyw9Uz4Bmy-bIi4WUvYETgN-TLwGUv3EnW0vP1T3nWmk \t _blank 酶切位点的分布情况,因此DNA 序列上的微小变化,甚至1 个核苷酸的变化,也能引起限制性内切酶切点的丢失或产生, 导致酶切片段长度的变化。 　　优点：RFLP 标记的 HYPERLINK /s?wd=%E7%AD%89%E4%BD%8D%E5%9F%BA%E5%9B%A0tncprfenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1Ydmvc3P1DdP1wWP1w9mH-W0ZwV5Hcvrjm3rH6sPfKWUMw85HfYnjn4nH6sgvPsT6KdThsqpZwYTjCEQLGCpyw9Uz4Bmy-bIi4WUvYETgN-TLwGUv3EnW0vP1T3nWmk \t _blank 等位基因具有共显性的特点,结果稳定可靠,重复性好,特别适应于构建遗传连锁图。 　　缺点：在进行RFLP 分析时,需要该位点的DNA片段做探针,用放射性同位素及核酸杂交技术,既不安全又不易自动化。另外,RFLP 对DNA 多态性检出的灵敏度不高,RFLP 连锁图上还有很多大的空间区。 　　1.1. 2 ?RAPD 标记技术。 ? ? ? ?为了克服RFLP 技术上的缺点,Williams等于1990年建立了随机扩增多态DNA Randomamplified polymorphic DNA