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从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定实验报告 林淑丽 （漳州师范学院生物系食品科学与工程10级 101304116） 【摘要】【关键词】ISOLATED FROM SOIL MICROBIAL AND PURE TRAINING PRELIMINARY OBSERVATION APPRAISAL EXPERIMENT REPORT Lin Shuli (Food science and engineering 10 levels in biosystem department,zhangzhou normal university 101304116) 【abstract】skilled purification microbial the basic operation of the technology, and the soil of the microbial separation and purification, according to the colony morphology observation and a series of physiological and biochemical results, the comparison species features of separation and purification preliminary identification of microbial subordinate groups. 【Key Words】bacteria， mould， Actinomyces， Culture medium preparation， High-pressure steam sterilization， Flat crossed， Cant vaccination 培养基各成分的作用： ①牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐，其中琼脂起凝固剂的作用。 ②高氏I号培养基：琼脂只是固体培养基的支持物；就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类；K2HPO4?3H2O 主要起调节PH值的功能,磷酸二氢钾会和磷酸氢钾形成一个缓冲对,能调节酸碱度在一定的范围。 ③马丁氏培养基：葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4?7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。其中琼脂起凝固剂的作用。 1材料与方法 1.1 培养基的配制 1.1.1 细菌培养基的种类 细菌、放线菌、酵母菌三类微生物培养基的配制 1.1.2 实验材料和用具 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl，KNO3 K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeS04·7H2O，马铃薯，蔗糖等。 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙， pH试纸(pH 5.5~9.0)，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 1.1.3 培养基的配方 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，,NaCl 0.5g，,水100mL，pH7.4~7.6 1、称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白胨可分别放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解 在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补充所失水分。 3、调pH 用pH试纸或酸碱度计检测培养基的pH值，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaoH，边加边搅拌，并随时检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用１mol/l HCL进行调节。pH调节通常放在加琼脂之前。注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 4、过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。 5、分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培养基约试管高度的1/5；分装入三角瓶内的以不超过其容积的一半为宜，半固体培养基以试管高度的1/3为宜。 6、加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要适合，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长