小球藻培养过程中流加碳源与氮源对其生长的影响.docVIP

长沙环境保护职业技术学院毕业论文 小球藻培养过程中流加碳源与氮源对其生长的影响 姓 名： 学 号： 606073119 指导教师姓名： 蔡水文老师 指导教师姓名： 吕立获生物技术部主管 浙江普洛家园医药科技有限公司 系部名称： 环 境 科 学 系 专业名称： 生物技术及应用 班级名称： 0731班 论文提交日期： 2010年6月12号 目 录 摘要 …………………………………………………………………………………3 引言……………………………………………………………………………………4 1实验部分 …………………………………………………………………………4 1.1 实验材料……………………………………………………………………4 1.2 培养过程……………………………………………………………………4 1.3 测定方法……………………………………………………………………5 2 结果与分析………………………………………………………………………5 2.1 50 L发酵罐培养结果与分析………………………………………………5 3 结论 ………………………………………………………………………………9 参考文献 …………………………………………………………………………9 致 谢……………………………………………………………………………10 摘 要 单细胞绿藻在医疗保健、环境保护、生物能源领域等众多领域由很大的用途，并且具有很大的经济效益。但是现在在的小球藻生产工艺还欠成熟，主要问题是其产量不高发酵周期较长，因此如何高效培养出超高细胞浓度小球藻各个企业与实验室想突破的问题。小球藻培养是一个具有高度非线性、时变性和迟滞性的过程，其内在机理非常复杂，传统的培养方法难以实现对小球藻高产的目的，因此对培养、发酵过程进行优化培养很困难。本文主要研究的是对小球藻培养过程中流加与不流加葡萄糖、硝酸钾对小球藻发酵的影响。经过实验结果得知在对数生长期控制葡萄糖浓度与硝酸钾浓度在20g/L、2.2-2.5g/L可以大大提高生长速率与产量。 关键词：小球藻 培养；流加；葡萄糖；硝酸钾 小球藻培养过程中流加碳源与氮源对其生长的影响 引言 单细胞绿藻在水产养殖、环境保护、人类健康食品和重要生命活性物质生 产等众多领域的研究与应用得到不断扩展，而如何高效培养出超高细胞浓度小球 藻来满足各个应用领域的需要是我国急待解决的藻类生物技术关键课题。本文主 要针对小球藻的发酵培养流加碳源与氮源的研究，从而得出最佳流加浓度培养条 件达到高产的目的。 1实验部分 1.1实验材料 实验所用菌种是由华中理工大学提供，实验过程中采用食品级葡萄糖和分析 纯硝酸钾分别作为小球藻生长的碳源和氮源，其他所用试剂均为分析纯。 1.2 培养过程 首先采用三角瓶，在温度30℃和摇床转速200 r／rain条件下异养批量培 养小球藻，培养3d左右后收获直接作为50 L半自控发酵罐的藻种。 在批量和发酵培养过程中所用培养基成分和含量均由华中理工大学自主研 制，初始pH为6．50左右。根据小球藻的不同生长期，采用700 g／L葡萄糖不 同量的流加，氮源、微量元素适情况添加。 实验所用培养基和容器均经过121℃、30min的高温、高压灭菌，发酵培养的 控制条件是：温度为30℃，灌压0.05Mp,50L、1.5 m3／(L·h) ，培养过程中根 据所消耗氧的量来调节通气量和电机频率进而提高氧的含量液中（培养液中氧的 含量不低于20%，否则无法正常生长），调一次通气量调 一电机频率，交替进行。 1.3 测定方法 在发酵培养过程中，分不同时间间隔进行取样分析,浊度比色法,721型分光 光度计测定培养液在680nm处的吸光度（OD680）。糖浓度（G）,在线可显示溶氧 （DO）、温度、灌压。 采用分光光度计。在波长680 nm下以去离子水作为参比，分别测定稀释不同 倍数小球藻发酵液的光密度，以此代表小球藻的生物量。小球藻发酵液中的葡萄 糖浓度和硝酸根浓度分别采用碘量法和离子色谱法测定。 2 结果与分析 2.1 50 L发酵罐培养结果 下面三个图是在50 L发酵罐中,采用流加葡萄糖和硝酸钾方式或将葡萄糖和 硝酸钾全部加入到初始培养基中2种不同条件下,小球藻的生长、发酵液中葡萄糖 浓度和硝酸钾浓度的变化过程。 （a） 图1(a)显