剔毒护肝方与其拆方对大鼠骨髓干细胞增殖分化地影响.pdfVIP

受体影响小等优点。然而它也有～些问题有待解决：(1)与原位肝移植一样， 肝细胞移植同样存在供体短缺以及异种细胞移植长期免疫抑制荆的使用问题； (2)体内移植肝细胞长期存活和增殖困难。 骨髓存在大量成体干细胞，主要包括造血干细胞和基质干细胞。目前，很 多研究表明骨髓干细胞具有向～些成体细胞分化的潜能，在一定诱导条件下， 可分化为神经细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、肝实质细胞等。体外诱导培养 和体内肝内微环境已证实骨髓干细胞可分化为肝实质细胞。日本学者oh等… 通过骨髓细胞体外培养，采用肝细胞生长因子(hepatocyte 诱导，首先在体外观察了HGF对骨髓细胞向肝细胞的转分化作用。Petersen等 口】最早发现接受骨髓移植的鼠肝内存在骨髓来源的肝细胞，通过一系列实验证 明肝卵圆细胞来源于骨髓。国内学者【3“】研究发现，利用部分肝切除后的肝损 伤血清和HGF分别对骨髓干细胞进行诱导培养，结果示两组均可向肝系分化， 但盯再生血清组表达更强于HGF组，说明肝再生血清对骨髓干细胞有更为强大 的诱导分化作用。骨髓干细胞具有取材方便，体外培养增殖能力强，易于表达 外源基因，自体移植不存在免疫排斥问题，是细胞移植中理想的种子细胞。我 们希望控制骨髓于细胞的培养条件，使其向肝系分化，并最终分化为肝细胞， 或通过直接骨髓干细胞移植后，在体内加入触发因素，使骨髓细胞分化为肝细 胞，并在肝内定植。 中药食药血清对骨髓干细胞多向分化的研究也有报道。陈东风【5]等利用龟 板含药血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元，结果示诱导12h后神经 元样细胞NF阳性表达即达到高峰。杨立业16l等利用丹参诱导骨骨间充质干向 神经元分化，结果示分化的细胞早期表达巢蛋白和Musashi1蛋白，后期则表 达神经元的标志物神经元特异性烯醇化酶和神经微丝M，在最适合的诱导条件 下约50％～60％的细胞表达这两种神经元的标志物。马慧萍【_7】等研究淫羊藿总黄 酮对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨性分化的影响，结果示淫羊藿总黄酮含 药血清能强烈刺激细胞增殖，成倍增加碱性磷酸酶染色阳性克隆数。吴理茂等 隅】研究中药归元方与自体骨髓干细胞移植对急慢性肝损伤的治疗作用，结果： 归元方与自体骨髓干细胞移植可减小肝损伤区域，改善肝功能，使纤维肝组织 表达斗PA增强，降低血清ALT、AST、PCIII、HA和肝组织羟脯氨酸的含量， 改善肝组织肝纤维化评分，骨髓干细胞能在肝损伤、肝纤维化形成环境中存活、 增殖，并向肝细胞分化，表达肝脏特异的角蛋白CKl8。 本课题采用导师聂广教授根据临床经验总结出的防治慢性肝病的有效组 方，采用中药血清药理学实验方法，观察其对大鼠骨髓干细胞增殖和向肝系分 化的影响，从细胞表型和功能两方面进行检测，为其应用提供新的思路。 材料与方法 1 实验材料 1．1 实验动物 医科大学实验动物中心(动物合格证号2004A068)。 1．2 药物 中草药黄芪、莪术、叶下珠购自深圳市药材公司，由深圳市东湖医 芪(O_39／m1)制成水煎剂。 1．3 主要仪器设备 见表1，均为深圳市东湖医院肝病研究所所有。 表l 实验用主要仪器设备 名 称 厂 家 Mco．15A型c02培养箱 日本sANYO公司产品 szx型超净工作台 上海蒲东跃欣科学仪器厂产品 37xB型倒置显微镜 上海医疗器产品 A一200型分析电子天平 美国Denver公司产品 HPLc／uF纯水系统 美国LABcoNcO公司产品 ELx800型全自动酶标仪 BIOKIT公司产品 u-1 500型紫外分光光读计 日本日立公司产品 16R-uNIVsERSAL低温高速离心机 BlO．RAD公司产品 s．HH．w1型数字显示恒温水浴箱