针刺“内关”穴对快速性心律失常大鼠心电及心肌Gi、Gs、PKA含量影响.pdfVIP

针刺“内关穴对快速性心律失常大鼠心电 及心肌Gi、Gs、PKA含量的影响 专业：针灸推拿学 研究生：胡婷婷 导师：郑利岩教授 摘 要 目的：本实验制作快速性心律失常大鼠模型，以针刺大鼠“内关”穴为施加因素，激动型 经舌下静脉注射乌头碱造成快速性心律失常模型，电针刺激双侧“内关”穴，通过心电图(ECG)， 观察针刺前后心律(率)的变化；以蛋白印迹法测定大鼠心肌组织抑制型G蛋白(Gi)、激动 可调节大鼠过快的心率，纠正异常心律；G蛋白藕联的信号传导通路在针刺“内关”穴对快速 性心律失常的调节中有重要作用。 blot 关键词：内关：心律失常；心电；蛋白激酶A；Gs蛋白、Gi蛋白；Western ．埠—‘ 刚 看 G蛋白藕联受体介导的信号转导是较为普遍的信号转导途径，由多个信号通路组成。 功能的。G蛋白藕联受体介导的信号转导，其中重要的作用之一是维护心血管功能，主要表现 在调节血压、心率、心肌收缩。G蛋白存在于细胞膜上，当细胞外信号(如激素、神经递质) 白激酶A(PKA)含量减少，产生抑制性的生物学效应。 心律失常属于祖国医学心悸、怔忡等范畴。指心脏冲动的频率、节律、起源、部位、传 导速度或激动次序的异常【|J；分缓慢性和快速性两类。针刺是一种行之有效的治疗手段，且针 某些生物学特性相符：维护心血管功能和针对机体的兴奋状态产生抑制调节作用。据此推测G 蛋白藕联的信号转导通路可能参与了针刺“内关”穴调节心律失常的作用过程。 关穴调节快速心律失常的机制。 实验材料与方法 1实验对象 6 2实验仪器设备及实验试剂 2．1实验仪器设备 机(JY92．II)。 2．2实验试剂与药品 anta 抗体：Gos，Gai1／2／3(均购自美国S 乌头碱(批号：110720--200410，购于中国药品生物制品检定所)； 异搏定(批号：4E12002，购于辽宁中医药大学附属一院，上海禾丰制药有限公司)。 10mg／mlEB、琼脂糖、四溴乙烷电泳缓冲液(以上试剂由中国医科大学生化教研室提供)； buffered solution)缓冲溶液(由辽宁中医药大学实验中心提供)； PBS(phosphate urethane)(乌拉坦，由实验针灸电生理实验室提供)； 20％氨基甲酸乙酉匕(ethyl 3实验条件 实验室温度20．-一22。C，相对湿度4050％，环境相对无菌无尘。 4实验方法 4．1模型制作 号记录分析系统，将针状电极插入四肢末端内侧皮下(红一右上肢，黄一左上肢，绿一左下 肢，黑一右下肢)，记录标准肢体II导联。麻醉15分钟，待大鼠处于安静状态后丌始记录， 纸速100毫米／秒，每次连续记录10秒钟，计算平均值作为实验大鼠的心率。 4．1．2造模方法 ， 快速性心律失常模型：参考刘菊芳等人Pl方法，于舌下静脉注射0．002％的乌头碱 lml／Kg。以注射乌头碱后，数秒至4分钟内心电图出现室性早搏、室(上)性心动过速等心 律失常波形为造模成功标志。 4．2实验动物分组 将40只大鼠随机分为5组： A正常组：麻醉后，不做任何处置，观察20分钟日寸记录ECG，取材； B乌头碱造模组：注射乌头碱造成快速性心律失常模型，模型成功30分钟时记录ECG， 取材； C乌头碱加电针“内关”穴组：注射乌头碱，模型成功20分钟时记录ECG，再电针双侧 “内关”穴10分时记录ECG，取材； D乌头碱加电针“足三里”穴组：注射乌头碱，模型成功20分钟时记录ECG，再电针双 侧“足三里”穴10分钟时记录ECG，取材； E