新农抗702对水稻纹枯病菌物质代谢的影响.docVIP

新农抗702对水稻纹枯病的影响 。物质代谢包括分解代谢和合成代谢，两者处于动态平衡当中，如此平衡被打破，生物体将发生病变，甚至导致死亡。为研究新农抗702对水稻纹枯病的影响水稻纹枯病菌水稻纹枯病、蛋白质 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)江西农业大学。 1.1. 抗真菌霉素702 (Antifungalmycin 702)(纯度99.46%由江西农业大学生物应用微生物实验室提供，精密称取，用甲醇溶解配成μg/mL的母液。 其它试剂均为分析纯或按国家标准GB)规定要求 1.1.3培养基 PDA培养基0g，切块煮沸，四层纱布过滤，加20g，琼脂g，熔化后定容至1000mL PD培养液：配制同PDA培养基，但不加琼脂； Czapek’s培养液：硝酸钠3g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30g、琼脂20g、 蒸馏水1000mL。 1.1.4主要仪器设备 LRH-250A型生化培养箱广东医疗器械厂 AdventurerTM电子精密天平奥豪斯国际贸易上海有限公司 手提式蒸汽压力灭菌锅、卧室灭菌锅(上海医用核子仪器厂) 无菌操作工作台苏州安泰空气技术有限公司 UV765紫外分光光度计（上海精密科学仪器） 1.2 试验方法 1.2.1农抗702对水稻纹枯病 1.2.1.1 菌体的培养 将培养2d的供试水稻纹枯病菌打取直径为10mm的菌块接种于PD培养液中，然后加入新农抗702，μg/mL，25℃ 180rad/min培养2d。4000rpm离心10min收集菌体，蒸馏水洗3次，抽滤得新鲜菌丝体，4℃冰箱保存备用。 1.2.1.2 葡萄糖标准曲线的制备 500μg/mL葡萄糖标准溶液的配制：称取0.5g分析纯的葡萄糖，80℃烘干至恒重。准确称量0.05g置于小烧杯中，加入少量蒸馏水溶解转移到100mL容量瓶中，定容至100mL，混合均匀。按下表将其稀释为不同浓度，做葡萄糖标准曲线，标准曲线方程为： Y=0.0085X-0.3749 R2=0.9981 表葡萄糖标准曲线的 Table 3-1 Determination of glucose calibration curve 试剂 管 号 0 1 2 3 4 5 葡萄糖标准液mL) 0 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水mL) 2.0 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 DNS试剂mL) 2 2 2 2 2 2 1.1.3 水稻纹枯病菌总糖含量测定 精确称取不同处理的水稻纹枯病菌0.5g，加10mL蒸馏水，超声破碎10min（功率400w）。再加入蒸馏水20mL，浓硫酸 5mL，沸水浴10 min，流水冷却至室温，用10M NaOH 溶液调pH至中性，用蒸馏水定容至50mL ，4000rpm离心15min。取上清液0.2mL加蒸馏水稀释至2mL再加入mLDNS，沸水浴5min，混匀后于波长540nm处测定OD值。 1.2.2新农抗702对水稻纹枯病 1.2.2.1 菌体的培养 将培养2d的供试水稻纹枯病菌打取直径为10mm的菌块接种于PD培养液中，然后加入新农抗702，μg/mL，25℃ 180rad/min培养2d。4000rpm离心10min收集菌体，蒸馏水洗3次。80℃烘箱烘干至恒重。 1.2.2.2 脂肪含量的测定 精确称取不同处理的水稻纹枯病 公式（3-1） W：样品干重(g) W1：提取后残留样品干重(g) 1.2.3新农抗702对水稻纹枯病蛋白质的影响 水稻纹枯病 溶液的配制 双缩脲试剂：称取1.5g五水硫酸铜（CuSO4·5H2O）和6.0g酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O），用500mL蒸馏水溶解，再加入75mL 10％的NaOH溶液，定容至1000mL。 0.05 mol/L的NaOH溶液：准确称取2gNaOH，用蒸馏水溶解，定容至1L。 牛血清蛋白溶液：准确称取牛血清蛋白 0.5g 溶于 0.05 mol·L-1的NaOH溶液中，并定容至50mL，即为 10mg/mL的标准溶液。 标准曲线的制作：分别取 0、0.2、0.4、0.6、0.8 和 1.0mL 10mg/mL的牛血清蛋白标准溶液加入到盛有1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 和 0 mL H2O 的试管中，再分别加入 4mL的双缩脲，充分震荡，室温静置30 min，540 nm比色，以蛋白质含量（mg）为横坐标，吸光