绿色荧光蛋白的基因克隆与表达论文.docVIP

湖北师范学院 论文题目 绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达 作者姓名 樊恒达 专业名称 生物技术 准考证号 2008114020308 指导教师 王友如 中国·黄石 绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达 樊恒达 （湖北师范学院生命科学学院0803班学号：2008114020308，湖北 黄石） 摘要 目的：研究绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因在大肠杆菌中的基因克隆与重组表达。方法：从E.coli DH5ɑ中用碱法提取质粒的方法提取质粒pET-28a-GFP。然后用质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳对已经提取的产物进行电泳，确定从大肠杆菌中成功提取了质粒。再用限制性内切酶BamHI和NotI对成功提取的质粒进行酶切，并用质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳对酶切后的质粒进行电泳，用以确定已经提取的质粒中含有GFP基因。将含有GFP基因的质粒转化到感受态细胞E.coli BL-21中，用LB培养基对转化后的E.coli进行扩大培养。最后用IPTG诱导GFP基因表达可以看到浅绿色菌落。结论：本实验对学生掌握最基本的分子生物学试验技术奠定了基础。 关键词：绿色荧光蛋白 基因克隆 重组表达 转化 Green Fluorescent Protein (GFP) Gene Cloning and Expression Fan Hengda (class 3 grade 8, college of biology science ,Hubei Normal university, Huang Shi) : Abstract Objective: searching for the phenomenon of green fluorescent protein gene’s cloning and restructuring expression in the E.coli .Method: drawing plasmid pET-28a-GFP from E.coli DH5ɑ by using the method of Alkali Distillation .Then the selected production can be electrophored by using the AGE ,in order to make sure drawing successfully plasmid from E.coli. The selected plasmid is cutting by the extinction enzymes BamHI and NotI and the sliced plasmid can be electrophored by using the AGE in order to ensure the selected plasmid containing GFP gene .Converting the plasmid having gene of GFP into the feeling states E.c oli BL - 21 cells and cultivating it largely through the LB medium .Finally the IPTG can guide the expression of GFP gene and we can see light green clonies .Conclusion:This experiment sets up foundation for students to master the basical experimental technology of molecular biology . 目 录 引言 3 材料与方法 3 1材 料 3 1.1材料 3 1.2仪器 3 1.3试剂 3 2方 法 3 2.1重组质粒（pET-28a-GFP）的构建 3 2.2碱法提取质粒 4 2.3质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳 4 2.5.E.coliDH5α感受态细胞的制备及转化 4 2.6 扩大培养 4 2.7 GFP蛋白的诱导表达 4 结 果 5 1实验现象 5 1.1 碱法提取质粒 5 1.2碱法提取质粒电泳 5 1.3酶切质粒电泳 5 1.4重组质粒的转化及阴阳性对照 6 1.5 GFP蛋白的诱导表达结果 6 1.6 紫外灯下看到的绿色荧光蛋白 7 7 讨 论 7 参考文献 8 引言：2008年10 月 8日，瑞典皇家科学院把今年的诺贝尔化学奖授予绿色荧光蛋白（G