工业发酵灭菌.pptxVIP

工业发酵灭菌;知识目标 理解工业发酵常用灭菌方法的原理和适用范围 掌握工业发酵培养基和发酵设备灭菌工艺的选择 掌握无菌空气制备的基本知识和典型工艺要求;一、热灭菌法 1、火焰灭菌法 直接在火焰上灼烧灭菌，如接种针和一些金属小工具、试管口、三角瓶口等灭菌采用这种方法，该方法简单有效，但局限性很大。;2、干热灭菌法 进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160～170℃，1～1.5h。 实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。;湿热灭菌法 利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。 其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。 由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热蒸汽存在潜热。 蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件为121 ℃，30 min。 ;湿热灭菌法;湿热灭菌法;湿热灭菌法;应用范围 培养基，水，发酵罐等其他不适合干热灭菌的物品。 高压蒸汽灭菌法的注意事项： 完全排除锅内冷空气 灭菌完毕后要缓慢减压 压力降为零后打开盖子;二、辐射灭菌法 利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物 以紫外线最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2 m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。;三、化学药品灭菌法 某些化学药品及微生物发生反应（蛋白变性、酶失活、细胞通透性）而具有杀菌的作用。 化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等，不适用于培养基。 化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。;⑴ 高锰酸钾 高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物死亡，一般用0.1％～0.25％的溶液。 ⑵ 漂白粉 漂白粉的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有效。;⑶ 75％酒精溶液 75％酒精溶液的杀菌作用在于使细胞脱水，引起蛋白质凝固变性。对营养细胞、病毒、霉菌孢子均有杀死作用，但对细菌的芽孢杀死作用较差。常用于皮肤和器具表面杀菌。 ⑷ 新洁尔灭 新洁尔灭是表面活性剂类洁净消毒剂。它在水溶液中以阳离子形式及菌体表面结合，引起菌体外膜损伤和蛋白变性。10 min能杀死营养细胞，但对细菌芽孢几乎没有杀灭作用。一般用于器具和生产环境的消毒，不能与合成洗涤剂合用，不能接触铝制品。;⑸ 甲醛 甲醛(HCHO)是强还原剂，它能及蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用甲醛作为灭菌剂的根据。使用时可以以2份37％甲醛溶液与1份KMnO4混合，或者将37％甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。 ⑹ 过氧乙酸 过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细菌芽孢、真菌孢子和病毒都有杀灭作用。;⑺ 戊二醛 在酸性条件下，不具有杀死芽孢的能力，只有在碱性条件下，才具有杀死芽孢的能力，常用2％的溶液，常用于器具、仪器和工具等灭菌。 ⑻ 酚类 苯酚毒性较大，易污染环境，且水溶性差，使应用受到限制，而酚类衍生物的使用，扩大了作为消毒剂的使用范围。;四、臭氧灭菌;五、过滤除菌法 利用过滤方法阻留微生物，也可达到除菌的目的，这就是过滤除菌法。 此法仅适用于澄清液体和气体的除菌。工业上常用过滤法大量制备无菌空气，供好氧微生物培养过程使用。;第二节 培养基和发酵设备的湿热灭菌;灭菌程度及灭菌时间的影响 微生物的热死规律——对数残留定律 微生物受热死亡的主要原因是高热能使蛋白质变性，这种反应可认为是单分子反应，死亡速率可视为一级反应，即与残存的微生物数量成正比。;式中 N－经时间t后残存的活菌浓度（个/L)， N0—开始灭菌时原有活菌浓度（个/L)； t－灭菌时间（s,min） K－灭菌速率常数或比死亡速率常数（s-1,min-1）它的大小及微生物的种类和加热温度有关。在同等温度下，其值小，微生物的耐热性强。 从上式得