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第二章细菌感染的实验诊断 感染的诊断有赖于 从标本中检出病原体或检出病原体的可溶性抗原,或病原体的DNA 病人血清中检出病原体的抗体 本章主要讨论检出病原体的问题 第一节 实验诊断的目的与要求 一.目的 进行病原学诊断 进行药敏试验,指导合理用药 用作流行病学调查, 追踪传染源 研究病原生物与感染的关系 鲍氏痢疾志贺菌13型暴发 时间：1992年9月 发病：26名 死亡：10名 地点：某婴儿室 传染源：慢性携带者产妇 传播方式：通过污染操作台接触 鼠伤寒暴发 时间：1991年11月 地点：某婴儿室 发病：55名 死亡：23名 56件物品（被褥，尿布，奶瓶）中26件检出鼠伤寒沙门菌 二.诊断试验的选择 有价值的 快速简便的 特异性和敏感性高的 可用的方法: 查病原体:直接涂片 分离,对纯培养物进行鉴定 查可溶性抗原: 用已知抗体 查DNA:分子生物学方法 查抗体: 用已知抗原 IgM IgG: 效价有4倍以上增高 三.细菌鉴定流程 双歧检索: 以某一试验分 表解: 用多种试验整体分析 数字编码: 将多种试验分别编码, 数字化后查表 微量生化反应系统和自动化 各试验孔含不同试验的脱水底物 加入纯化的被检菌 孵育4-24h观察结果 人工读取根据编码资料判定菌种或 电脑读取 第二节 临床标本的采集与处理 一.标本采集的原则 早期,用抗菌药物前 根据病原体存在的部位采集相应标本 无菌技术,避免正常菌群污染,防止病原体播散 采用合适的方法 二.标本的处理 尽快接种到合适的培养基上 根据抵抗力选择保存和运输条件 厌氧菌 奈瑟菌 病毒 第三节 细菌的形态学检查 一.不染色标本 用悬滴法或压片 细菌是活的,可观察运动 加入特异抗体可抑制其运动 结合标本来源可作初步诊断,如霍乱,梅毒 用相差或暗视野显微镜效果更好 二.染色标本 革兰染色(Gram stain):紫色革兰阳性;红色革兰阴性. 注意细菌的大小,形状,排列以及着色的均一性 抗酸染色(acid-fast stain):红色抗酸阳性,蓝色抗酸阴性 荧光染色:更易观察 特殊染色可用于观察荚膜, 鞭毛等细菌的特殊结构 第四节 细菌的分离培养 一.细菌生长的要求 培养基:营养物质,pH7.4 气体: 需氧菌, 厌氧菌, 兼性厌氧 菌,微需氧菌 温度: 一般37°C 时间: 一般18~24h 二.培养基 1.对培养基的基本要求 足够的营养物质 合适的pH 无菌 澄清 2.培养基的种类 按培养基成分分: 基础培养基: 满足一般细菌要求 营养培养基: 满足苛求细菌要求 鉴别培养基: 加有被利用物和指示剂 选择培养基: 加有抑制剂,能抑制非目的菌生长 特殊培养基: 满足特殊细菌要求 按培养基物理性状分: 液体:增菌 固体:加2%琼脂,平板用于分离纯种,斜面用于传代或保存细菌 半固体:加0.5%琼脂,用于观察动力,保存菌种 三.主要的接种方法 分区划线法:用于分离纯种,多次烧灼减少菌数,以获取单个菌落 连续划线:不要求单个菌落,用于保存或繁殖细菌 涂布:使细菌长成菌苔,可观察细菌被抑制情况或用于繁殖细菌 倾注平板:少量细菌混于琼脂中倒板,计数,分离纯种 四.细菌生长的表现 固体基: 菌落形成,注意其 大小, 形状 表面, 边缘 质地, 透明度 溶血情况 液体基: 浑浊,菌膜,沉淀 五.纯种的获得 纯种是细菌学工作的基础 获得方法: 划线分离法(倾注平板法)获得大的单个菌落 斜面 纯培养物 纯培养物的外观表现应是一致的 六.培养细菌的目的 确定有无细菌 鉴定细菌 药敏试验 计数细菌 利用细菌:制备菌苗,生产抗生素或基因工程产品 第五节 细菌代谢产物的检测 一.细菌毒素的检测 内毒素:致热作用:兔体温 鲎试验 外毒素:体内:毒素与抗毒素的中和试验 体外:Elek平板法:沉淀反应 ELISA 毒素和抗毒素的中和试验 外毒素 ? 外毒素?+已知抗体 小白鼠 小白鼠 结果 发病 发病 有毒性,但不是相 应的 发病 不发病 是相应毒素 不发病 不发