生化学Ⅱ実験レポート.DOCVIP

実験A DNA cloning and sequencing analysis. １、要旨 目的となるDNAのシークエンスを行うために、最初にそのDNAをプラスミドに組み込み、大腸菌を用いて増幅をいった後、プラスミドだけを抽出することでDNAだけを増幅しシークエンスを行った。一連の実験を通してDNAのcloning、sequencingを習得し、遺伝子データベースの活用法を学習した。 ２、目的 ?全体…遺伝子組み換え操作の基本ともいうべき、大腸菌の形質転換能を応用した遺伝子cloning技術と、PCR法を応用したDNA sequence法の原理を習得し、さらに遺伝子データベースの活用法についての理解を深める。 ?１日目…実験で必要な溶液を調合し、実験がスムーズに進むようにする。 ?２日目…エンドヌクレアーゼ（今回の実験ではHindⅢ）を用いてλDNAとプラスミドを切断し、DNAリガーゼを用いてでつなぐことでDNAにプラスミドを組み込み組換えベクターを作成する。 ?３日目…２日目に作成した組換えベクターを大腸菌に組み込むことで、組換えベクターをもつ大腸菌を作成する。 ?４日目…３日目に作成した組換えベクターを持つ大腸菌を増幅し、それより組換えベクターのみを抽出、精製する。 ?５日目…大腸菌が形質転換を行う際には、ほんのわずかの細胞しかプラスミドDNAを組み込まないため、アガロースゲ