绵羊TLR4基因及克隆、序列分析及功能验证--杜金苓.pptVIP

绵羊TLR4基因的克隆、序列分析及功能验证 报告人：杜金苓 导 师：连正兴 单 位：中国农业大学 时 间：2009.10.13 引言 养羊业面临疾病的危险如：布氏杆菌病造成直接经济损失每年达数亿元，间接经济损失每年超过100亿 TLR4: 细胞壁中的LPS、LTA 前炎症因子: IL-6、IL-8、TNF-α等 IFN 实验内容 克隆绵羊TLR4基因 多个克隆测序分析 构建融合蛋白与非融合蛋白表达载体 在细胞水平进行功能验证探讨作用机制 结 果 三种片段长度，比例各不相同 2520bp、2742bp（+222bp）、2353bp(-167bp) pTLR4-IRES-EGFP转染胎儿成纤维细胞 结 论 发现绵羊TLR4基因的三种剪接体 筛选出过表达TLR4基因的成纤维细胞系 初步了解LPS刺激过表达TLR4基因的成纤维细胞后，IL-6、IL-8表达量升高，TNF-α 的表达具有时效关系 ！ * * 布氏杆菌主要侵害生殖系统，引起流产，并可诱发人兽共患，目前已遍布全世界，动物阳性感染率0.36%，人阳性感染率3.28% 革兰氏阴性菌：巴氏杆菌、弯曲菌、布氏杆菌---TLR4基因