L-丝氨酸的酶法合成及分析 朱一凡.docxVIP

L-丝氨酸的酶法合成及分析摘 要: 利用重组大肠杆菌表达丝氨酸羟甲基转移酶 (SHMT) 和色氨酸酶 (TPase)，并利用双酶法合成 L-色氨酸。采用 PCR 从大肠杆菌 K12 基因组中扩增上述两种酶的基因，利用 pET-28a 载体，构建单表达重组质粒 pET-SHMT、 pET-TPase 和共表达重组质粒 pET-ST。将上述 3 种重组质粒转入大肠杆菌 BL21(DE3)进行表达。SDS结果表明，单表达基因工程菌 BL21(DE3)/pET-SHMT 和 BL21(DE3)/pET-TPase 分别在 47 kDa (SHMT) 和 50 kDa (TPase) 处有蛋白表达带；共表达基因工程菌 BL21(DE3)/pET-ST 在上述两处均有蛋白表达带。与宿主菌相比，单表达 SHMT 基因工程菌产酶活性提高了 6.4 倍；单表达 TPase 基因工程菌产酶活性提高了 8.4 倍；共表达 SHMT 和 TPase 基因工程菌产酶活性分别提高了 6.1 和 6.9 倍。利用工程菌所产酶进行双菌双酶法和单菌双酶法合成 L-色氨酸。两菌双酶合成 L-色氨酸的累积量达到 41.5 g/L，甘氨酸转化率为 83.3％，吲哚转化率为 92.5％；单菌双酶合成 L-色氨酸的累积量达到 28.9 g/L，甘氨酸转化率为 82.7％，吲哚转化率为 82.9％。关键词: 丝氨酸羟甲基转移