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激光共聚焦扫描显微镜的应用
Living up to Life
激光共聚焦扫描显微镜的应用
样品中荧光的来源 Living up to Life
自发荧光
荧光染色（特异性荧光探针）
免疫荧光－荧光抗体
外源性荧光物质进入组织细胞内产生荧光
诱发荧光（Inducedfluorescence）
酶致荧光（Enzymaticallyproduced
fluorescence）
Living up to Life
•定位、定量研究
•三维成像
•动态测量
•FRAP
•FRET
Living up to Life
1.定位、定量研究中常用荧光探针
绿色荧光
*FITC(fluorescinisothiocyanate，异硫氰酸荧光素)
*DTAF(Dichlorotriazinylaminofluorescein)
红色荧光
*TRITC(四甲基异硫氰酸罗丹明)
*Rhodamine(罗丹明)
*TMR（tetramethylrhodamine,四甲基罗丹明）
*Texasred(德克萨斯红)
蓝色荧光
*AMCA(Aminomethylcoumarinaceticacid)
Living up to Life
标记细胞器荧光探针
1)线粒体Mitochondria
Rodamin123505/534 ，可染活细胞，阳离子,可检测线粒体膜
电位,且在多数细胞中停留时间短。
JC1 线粒体膜电位低时为单体490/527发绿光
线粒体膜电位高时为多聚体490/590发红光；
可标记活细胞线粒体，且为检测线粒体膜电位最佳探针。
MitotrackerGreenFM490/516, 染活细胞或固定细胞,稳定不漏出
MitotrackerOrangeCMTMRos551/576,(氧化型)
MitotrackerOrange还原型,只能染活细胞
Living up to Life
2)溶酶体Lysosome
中性红541/640:微偏碱性, 可标记溶酶体等酸性器官
为非特异性
AO
LysoTrackerGreenDND-26 504/511, 染活细胞
LysoTrackerBlue
LysoTrackerRed
3)内质网EndoplasmicReticulum
DiOC6484/500:非特异性,较高浓度标记内质网,
较低浓度标记线粒体
4)高尔基体Golgiapparatus
NBDC6-ceramie466/536,可染活或死细胞
Living up to Life
细胞器的单克隆抗体
5)细胞核
PIpropidiumiodide536/617 DNA/\RNA 死细胞
碘化丙啶
EBethidiumbromide518/617 DNA/RNA 死细胞
Hochest33342 352/461 DNA A-T 活细胞
Hochest33258 352/461 DNA A-T 活细胞
DAPI 358/461 DNA A-T 半通透细胞
Chromom
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