我国一株鹦鹉病毒的鉴定及其生化特性.PDFVIP

维普资讯 2 ～ 72 第14卷第3期 中 国 病 毒 学 Vo_【14 No．3 1999年 9月 VIROLoGI(A S N【 【CA Sep． 1999 我国一株鹦鹉病毒的鉴定及其生化特性 夏 苇 冯 锋 李天宪 陈绳亮 赵 林 — — — — — 一 — — — — — — 一 (中国科学院武汉病毒研究所，武汉 430071) s2-i、2 6卜 (华中师范大学生命科学学院．武汉 430079) {l4。f 摘 要 1995年作者从湖北濒死鹦鹉体 内分离到一株新病毒，经鹦鹉胚成纤维细胞盲传四代过渡 到鸡胚成纤维细胞，再传至第五代出现细胞病变 。适应细胞的病毒纯化后，经 SDS分析，发 ■ 现病毒粒子结构蛋 自由8条多肚组成，分子量范围在 14．5～60kD之 问。病毒的馥碱氨基馥之 比 为2．51．富含 Asp、Clu和 k ，而 Arg和 Met含量较少。病毒棱酸为舣链DNA，存在超螺旋型 、环 型和线型三种形态，G十C的含量为45％。经限制性 内切酶分析．核馥 的分子量 为 33×10D。根 据病毒分类的标准确认为澳州长尾小鹦鹉幼雏病病毒．应归属于乳多空病毒科多瘤病毒属 。 关键词 澳州长尾小鹦鹉幼雏病病毒，乳多空病毒科，多瘤病毒属 湖北云梦是我国最大的养鸟基地。七十年代起，养鸟业便在此悄然兴起，平均每年产商品 鸟400万对．远销东南亚各国及香港、澳门，年产值 3000多万元。1994年 2月起，云梦发生了 前所未有的大规模鹦鹉幼雏死亡，死亡率超过 80％，直接经济损失超过 1000万元。同时，北 京、山东等地养鸟业也遭受重刨。 1995年冯锋等人…从濒死鹦鹉幼雏体内分离到一种大小约 50m 的病毒粒子，经初步纯 化后在健康的澳州长尾小鹦鹉体 内进行了感染试验 ．证 明该病毒是引发鹦鹉幼雏死亡的主要 病原。为了进一步探索有效的防治方法，本研究对该病毒的生化特性进行了研究．完成 了此病 毒的鉴定工作 ．确定了其分类地位 。 1 材料与方法 11 标本来源 濒死鹦鹉幼雏 由湖北省云梦县 畜牧局提供。 1．2 病毒的初步分离 取典型症状的濒死鹦鹉若干只，在无菌条件下取心、肝、脾等脏精，睹碎后低速离心． 取上清留待细胞培养用。 13 病毒的细胞培井 选取l0～16日龄鹦鹉胚做鹦鹉肛成纤维细胞(BEF)，接参考文献[2]的方法。选用含 5％小牛血清的 199培养液。当BEF长成 80％单层后，接种分离的病毒液05mL／瓶。培养7d后，收获细晦 液，冻融三次．离心后取上清05mL，再接种原代 BEF，这样每隔4--5d盲传一次，盲传数代后．观察有无细胞 病变 (CPE)。同时，将每次 BEF盲传的分离物接种鸡胚成纤维细胞 (CEF)，观察有无 CPE。 1．4 病毒的浓缩与纯化 将产生CPE的细胞液冻融三次，低速离心取上清，再经 10000r／min高速离心30 min和 105630g超速离心 2h，沉淀用 PBS悬浮。浓缩的病 毒液经 Sepharose-2B柱层折纯化，方法 同文献