二硫苏糖醇还原r高效液相色谱法测定蔬菜中的还原型-江苏农业科学.PDF

— ３０４— 江苏农业科学　２０１６年第４４卷第７期 郑小曼，顾明华，沈方科，等．二硫苏糖醇还原－高效液相色谱法测定蔬菜中的还原型维生素Ｃ和总维生素Ｃ含量［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６， ４４（７）：３０４－３０７． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０７．０８９ 二硫苏糖醇还原 －高效液相色谱法测定蔬菜中的 还原型维生素 Ｃ和总维生素 Ｃ含量 郑小曼，顾明华，沈方科，路　丹，韦燕燕，王学礼 （广西大学农学院农业环境与农产品质量安全重点实验室，广西南宁５３０００４） 　　摘要：研究建立高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）快速检测蔬菜中还原型维生素Ｃ含量的方法，并通过二流苏糖醇（ＤＤＴ） 还原脱氢型维生素Ｃ，从而得到总维生素Ｃ、脱氢型维生素Ｃ含量。以３％偏磷酸为提取液，乙腈－０．０１５ｍｏｌ／Ｌ磷酸 二氢铵溶液（体积比８５∶１５）为流动相，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ，采用ＷａｔｅｒｓＣ－１８（１５０ｍｍ×３．９ｍｍ，５ ｍ）反相色谱分 μ 离，用紫外检测器于２５４ｎｍ波长下检测。结果表明：在１～５００ｍｇ／Ｌ浓度范围内线性良好（ｒ＝０．９９９６），所有蔬菜样 品检测相对标准偏差为０．６３％～１．８３％，平均加标回收率为９９．８９％。用该方法测定蔬菜中维生素Ｃ含量，结果稳 定、重现性良好，适用于维生素Ｃ含量范围较大及颜色各异的多种蔬菜。 　　关键词：高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）；二流苏糖醇（ＤＤＴ）；蔬菜；总维生素Ｃ；还原型维生素Ｃ 　　中图分类号：Ｓ１３２；Ｏ６５２．６３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０７－０３０４－０３ ［１］ 　　维生素 Ｃ是一种人类必需的营养素 ，其主要形式为 比色法、荧光光度法、电位法、紫外分光光度法等，但是这些方 Ｌ－还原型、Ｌ－脱氢型，最主要的功能是参与胶原蛋白质的 法或存在所需试剂较多、试剂不稳定、操作繁琐等缺点［８－１０］， ［２］ 合成，动物缺乏维生素Ｃ会造成坏血病 。作为一种抗氧化 或只能测定还原型维生素Ｃ含量，不能测定具有同样生理功 ［１１］ 剂和高活性物质，维生素 Ｃ参与许多新陈代谢过程，可以保 能的脱氢型维生素Ｃ含量，如荧光法、苯肼比色法 。 护人体免于自由基的威胁，具有提高免疫力，预防癌症、心脏 高效液相色谱（ＨＰＬＣ）是近年来发展起来的一种快速高 ［２－４］ 病、中风，保护牙齿和牙龈，抗衰老等许多生理作用 。有 效且稳定可靠、发展较快的分离技术，因其处理样品简单快 ［５］ 研究表明：一定剂量的维生素Ｃ可抗细胞 ＤＮＡ损伤 ；在老 速，且能同时测定几种维生素而被广泛应用于食品药品中维 ［６］ ［８－１７］ 鼠铅中毒的同时及其后，补充维生素 Ｃ可降低血铅浓度 ； 生素含量的测定 。但是，该方法目前主要测定的是还原 ［７］ ［１１］ 此外，维生素Ｃ还具有预防乙醇对脑、肝损伤的作用 。人 型维生素Ｃ ，而对蔬菜中同样具有生理功能的脱氢型维生 类自身不能够制造维生素Ｃ，其广泛的食物来源为各类新鲜 素Ｃ含量的检测报道较少。本研究通过利用二硫苏糖醇 果蔬，并且蔬菜中的总维生素Ｃ含量相比还原型维生素Ｃ