催化ATP生成O构象（open）.PPT

目 录 第三节 氧化磷酸化 氧化磷酸化：电子从NADH或FADH2经电子传递链传递到分子氧形成水，同时偶联ADP磷酸化成ATP的过程。 三、 氧化磷酸化的偶联机理 　　　1961年 Peter Mitchell 提出了化学渗透假说 (Chemiosmotic Hypothesis)”，70年代关于化学渗透假说取得大量实验结果的支持，成为一种较为流行的学说，Mitchell本人也因此获得1978年诺贝尔化学奖。 化学渗透学说的主要论点： 化学渗透假说原理示意图 (1)发现: 在二十世纪七十年代初，Humberto-Fernandez Moran 用负染技术发现:线粒体内膜的基质一侧的表面附着一层球形颗粒，球形颗粒通过柄与内膜相连。几年后，Efraim Racker分离到内膜上的颗粒，称为偶联因子F1-F0，又称F1-F0-ATP合酶，也称复合体V。 ATP合酶：状如蘑菇。分为球形的F1（头部）和嵌入膜中的F0（基部）。 F1由5种多肽组成α3β3γδε： 每个β亚基具有一个催化ATP合成的位点； α和β亚基交替排列，状如桔瓣； γ贯穿αβ复合体，并与F0接触； ε帮助γ与F0结合。 δ与F0的两个b亚基形成固定αβ复合体的结构。 F0由三种多肽组成ab2c12，嵌入内膜： 12个c亚基组成一个环形结构，与F1的γ亚基结合，并具有质子通道，可使质子由膜间隙流回基质。 1979年代Boyer P提出“结合变化机制”的要点如下： ATP合酶的F1具有三个催化位点，其构象不同： L构象（loose）：ADP、 Pi与酶疏松结合在一起； T构象（tight）：底物（ADP、 Pi）与酶紧密结合，催化ATP生成； O构象（open）：ATP与酶的亲和力很低，被释放出去。 构象变化的机制 ：当质子通过F0时，引起c亚基环的旋转，从而带动γ亚基旋转，由于γ亚基的端部是高度不对称的，它的旋转引起β亚基3个催化位点构象的周期性变化（L、T、O），不断将ADP和Pi加合在一起，形成ATP。 支持构象耦联假说的实验： 1．日本的吉田（Massasuke Yoshida）等人将α3β3γ固定在玻片上，在γ亚基的顶端连接荧光标记的肌动蛋白纤维，在含有ATP的溶液中温育时，在显微镜下可观察到γ亚基带动肌动蛋白纤维旋转。???????????????????????????????? 　英国科学家Walker通过x光衍射获得高分辩率的牛心线粒体ATP酶晶体的三维结构， 证明在ATP酶合成ATP的过程中，三个β亚基的确有不同构象， 也有力地支持了Boyer的假说。 旋转催化理论要点 质子流通过Fo引起亚基III 寡聚体和转子转动； 这种旋转使? /?亚基相互作用,引起?亚基构象变化，合成ATP； ?亚基被认为是转子,亚基I、II、Ⅳ与?亚基组合在一起组成定子,它压住? /?异质六聚体. 四、氧化磷酸化的偶联部位和磷氧比 实验方法：将分离的线粒体内膜小泡与抗霉素A一起温育，由于抗霉素A阻止电子通过Cytb-c1，NADH释放的电子只能传递到辅酶Q。 实验测得：每传递一对电子只合成一分子ATP。 结论：复合物Ⅰ是ATP合成的偶联位点。 磷氧比（ P/O ） 1940年，S.Ochoa测定了在呼吸链中O2的消耗与ATP生成的关系，提出P/O比的概念。（同位素实验） P/O比概念:电子经呼吸链传递,每消耗1mol的原子氧所消耗的无机磷的mol数,称为P/O比。 NADH经呼吸链氧化，P/O比为3 FADH2经呼吸链氧化，P/O比为2 磷氧比（ P/O ） 五、氧化磷酸化的解耦联 六、氧化磷酸化的控制 第三节 小结 一、电子传递和质子推动力 二、氧化磷酸化的概念 三、氧化磷酸化的偶联机理 化学渗透假说， ATP合酶 旋转催化理论 四、氧化磷酸化的偶联部位和磷氧比 偶联部位，P/O比 五、氧化磷酸化的解耦联 六、氧化磷酸化的控制 氧 化：放能 磷酸化：吸能 ADP+Pi ATP ADP+Pi ATP ADP+Pi ATP 1/2O2 电子传递系统中四种复合物的特性 ＋ ＋ － ＋ ATP合成 +0.53 +0.18 +0.02 +0.34 △E0′(V) 细胞色素c→O2 CoQ→细胞色素c 琥珀酸→CoQ NAD+→CoQ 反应顺序 细胞色素c氧化酶 CoQ-细胞色素c 还原酶 琥珀酸-CoQ 还原酶 NADH-CoQ 还原酶 名称 复合物Ⅳ 复合物Ⅲ 复合物Ⅱ 复合物Ⅰ ? 1molATP时，需要提供的能量至少为ΔG0‘=-30.5kJ/mol，相当于氧化还原电位差ΔE0’=0.15V。 氧化磷酸化偶联位点的实验证据 O2 1 2