用芳香醇同系物研究疏水色谱的保留机理.PDF

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 6 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 6 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 641～644 研 究 报 告 用芳香醇同系物研究疏水色谱的保留机理 卫引茂 　赵建国　姚　丛　耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所 ,现代分离科学陕西省重点实验室 ,西安 710069) ( ) 摘 　要 　首次研究了芳香醇同系物在疏水色谱 HIC 中的保留行为。同系物的保留符合同系物规律。随绝 对温度倒数的增加 ,保留值先增大而后减小 ,符合 Van′t Hoff 曲线方程。用计量置换保留模型中的参数表征了 同系物分子的性质 ,揭示了 HIC 中小分子的保留在本质上与反相色谱相同 ,均由非选择性疏水作用力所控 制。证明了用中性小分子作为溶质研究 HIC 保留机理是一个新方法 ,为研究生物大分子在疏水色谱中的保 留机理奠定了基础。 关键词 　疏水色谱 ,芳香醇同系物 ,保留机理 ,计量置换保留模型 1 　引　　言 疏水色谱( ) HIC 具有分离条件温和、能维持生物大分子的立体结构不变的优点 , 已成为一种十分重 要的分离活性生物大分子的色谱方法。有关生物大分子的色谱保留机理 ,文献中对流动相中盐与生物 1 ( 大分子保留关系的研究报道较多 , 已提出的主要模型有疏溶剂化理论 、计量置换保留模型 SDM R) 2 、熵增原理3 和多价吸附作用模型4 等理论。依据 SDMR , 水是 HIC 中的置换剂2 , 并首次由 Perkins 用实验所证实5 。然而有关对蛋白质在 HIC 中热力学研究很少 ,这是因为随着温度变化 ,蛋白 分子的立体结构发生了变化 ,从而使蛋白质在 HIC 中保留的热力学研究变得很复杂。为揭示蛋白分子 在 HIC 中的保留机理 ,应首先了解结构简单的分子在 HIC 中的保留行为。芳香醇同系物在结构上和生 物大分子相似均具有亲水基团和疏水基团 ,但分子构象不随温度变化 ,且呈电中性。因此 ,本文提出用 芳香醇同系物作为研究对象 ,依据 SDMR 研究其在 HIC 上的保留行为 ,并与文献中报道的反相色谱 (RPLC) 的结果相比较证明其合理性 ,避免了用蛋白质研究 HIC 保留机理带来的复杂性。 2 　实验部分 21 　仪器和试剂 ( ) LC6A 型高效液相色谱仪 日本岛津公司 ,包括 SCL6A 系统控制器 ,SPD6A 紫外检测器 ,两台 LC 6A 泵。聚乙二醇型疏水色谱填料为本实验室合成 , 以高压匀浆法装成 100 ×4. 6 mm I. D. 柱。柱温由超 级恒温水浴控制 ,精度为 ±0. 2 ℃。 ( ) ( ) 实验所用的芳香醇同系物 碳数值为 1～4 均购自 Aldrich 公司 ,用甲醇水溶液 1 ∶1 , V/ V 配成 5 g/ L 溶液 ,其它试剂均为分析纯试剂 ,水为二次蒸馏水。 2 . 2 　实验方法 在所有实验中 ,流动相由 A 液和B 液混合而成。A 液分别为 3. 0 mol/ L (NH4) 2 SO4 、4. 0 mol/ L NaCl 、 5. 0 mol/ L NH Ac