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疏 水 层 析 （HIC） 一 实验原理 疏水层析(Hydrophobic Interaction Chromatography HIC) 是利用被分离 样品中不同生物分子表面的疏水性差别，而将其分离纯化的一种层析技术。疏 水层析的介质通常是一类在惰性支持物上接有疏水基团的层析载体，如苯基琼 脂糖（Phenyl Sepharose）, 辛基(Octyl),丁基(butyl) 琼脂糖等。 对于不同的蛋白质和多肽而言，其分子表面一般有着不同的疏水和亲水结构 区域，当将这些生物样品加入到含有高盐（高离子）浓度缓冲液的HIC 柱中时， 由于溶液中高浓度盐离子与水分子的作用，降低了样品分子的溶剂化作用，从而 增加暴露了样品分子表面的疏水区，这样就促使样品分子表面疏水基团与HIC 柱 上的疏水基团相互作用结果使样品被吸附到HIC柱上。因此疏水层析亦称疏水相 互作用层析。样品吸附在 HIC柱上的强弱程度，取决于样品本身的疏水性质和样 品环境中盐离子的强度。 一般来说疏水性强的只需要较低的盐浓度，疏水性弱的则需要较高的盐浓度 [如1.0 mol/L (NH4)2SO4]。吸附在HIC柱上的生物分子，可以采用降低洗脱液中 盐浓度的方法，使其从柱上洗脱下来，洗脱方法可以是梯度也可以是阶段洗脱的 方式。样品中不同分子被洗脱的顺序依据其疏