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[解析]　检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取 104、105、106 倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板为代表进行计数。 [答案]　D [例2]　(2011·新课标全国卷)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题： (1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 ________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。 (2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有] 两种，即________________和____________________。 (3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大 小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。 (4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭 菌方法有灼烧灭菌、____________和_____________。 无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 [解析]　本题主要考查生物技术实践中微生物的培养与分离，意在考查对相关知识的灵活运用能力。(1)欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基。(2)分离纯化菌种时，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株，在 菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。 [答案]　(1)原油　选择 (2)平板划线法　稀释涂布平板法 (3)强 (4)干热灭菌　高压蒸汽灭菌　火焰 1．细菌数量的测定的注意事项 (1)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板 进行计数。 (2)在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后 求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中 细菌的数目，如果某个平板的菌落数与其他差别甚远， 说明该平板操作过程中出现失误，应舍弃。 (3)统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个 或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌 落。因此，统计结果用菌落数而不是活菌数来表示。 2．微生物的培养 (1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常 用的氮源是铵盐、硝酸盐。 (2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳 源，又是氮源。 (3)病毒与细菌不同，不能用普通培养基培养，而是用 活细胞培养，常用于培养病毒的是活鸡胚。 命题 热点 (1)酶在食品制造和洗涤等方面的应用 (2)制备和应用固定化酶 命题 角度 此类问题在高考中常从以下角度考查：一是以非选择题的形式考查酶的固定与酶在生产生活中的应用；二是联系果汁加工生产、加酶洗衣粉等生产生活实际，考查酶特性探究实验 [例3]　(2011·江苏高考)下列有关酶的制备和应用的叙述，正确的是 (　　) A．酶解法和吸水涨破法常用于制备微生物的胞内酶 B．透析、电泳和酸解等方法常用于酶的分离与纯化 C．棉织物不能使用添加纤维素酶的洗衣粉进行洗涤 D．多酶片中的胃蛋白酶位于片剂的核心层 [解析]　本题以酶为载体，综合考查有关酶的制备与应用的知识。酶解法可去除微生物的细胞壁，再通过吸水涨破法使细胞内的物质释放出来，提取分离其中的胞内酶；透析和电泳可用于酶的分离和纯化，但酸解会破坏酶的结构；棉织物的主要成分是纤维素，可用含纤维素酶的洗衣粉洗涤，因为纤维素酶使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，达到更好的去污效果；多酶片中的胃蛋白酶应在片剂的糖衣外层，而片剂的核心层应是在小肠中发挥作用的胰蛋白酶等。 [答案]　A [例4]　如图1表示制备固定化酵母细胞的有关操作，图2是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示意图，下列叙述不正确的是 (　　) . A．刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制备 混合液 B．图1中X溶液为CaCl2溶液，其作用是使海藻酸钠形成 凝胶珠 C．图2发酵过程中搅拌的目的是使培养液与酵母菌充分 接触 D．图1中制备的凝胶珠用蒸馏水洗涤后再转移到图2装 置中 [解析]　本题考查固定化细胞技术的基础知识，意在考查对固定化酵母