曲古抑菌素A处理克隆胚对囊胚发育率的影响.pdfVIP

andFeed 畜牧与饲料科学 Animal Science 20lO，31(4)：15—16 Husbandry 曲古抑菌素A处理克隆胚对囊胚发育率的影响 胡连东，李永强，张 东 (内蒙古大学生命科学院，内蒙古呼和浩特010000) 核，以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植，用80nmol／LTSA处理供体细胞12h。核移植后继续处理克隆胚胎 理的克隆胚胎囊胚发育率。『结果1 nmol／L TsA处理12 TSA处理的12h的克隆胚胎。显著提高了体外发育能力。 关键词：曲古抑菌素A；克隆胚；囊胚；发育率 中圈分类号：Q813 文献标识码：A 核重编程是指核移植后哺乳动物卵母细胞擦除已分化 胞．把至少带有3层以上卵丘细胞且胞质均匀的卵丘卵母 的体细胞的表观遗传．。恢复为胚胎发育所必需的胚胎化基 细胞复合物放入直径30mm凹皿中培养。将凹皿放入38．5 因表达程序的过程111。克隆动物胚胎基因组的不完全重编程 ℃、5％C02和饱和湿度条件的培养箱中成熟培养20—22h， 可能是克隆动物成功率低的主要原因嗍。在停止供体细胞 成熟培养液为TCMl99。 本身的基因表达．恢复胚胎发育所需的基因表达模式的过 1．4牛卵母细胞核移植体外成熟后。将卵丘卵母细胞复 程中，由组蛋白乙酰化所引起的染色质重组也起着至关重 合物移入0．1％透明质酸酶溶液中消化，去掉卵母细胞表面 要的作用m。研究发现，组蛋白乙酰化程度和基因的转录活 的卵丘细胞。将卵母细胞置于体视显微镜下挑选有第一极 性呈正相关阎．组蛋白H3和H4在转录活跃的基因处是高 体的卵母细胞作为胞质受体。将挑选用于胞质受体的卵母 度乙酰化，与此相反，在沉默基因处是去乙酰化唧。组蛋白乙 细胞放入含0．5 Hoechst3334和7．5 O．g／mL veCmL细胞松弛 酰化，去乙酰化是分别由组蛋白乙酰基转移酶fHAT)和组蛋 素B的操作液微滴中平衡15rain。在显微操作仪下，用内径 15—20¨m去核针去除第一极，用注核针吸入供体细胞，将 白去乙酰基酶(HDAC)催化完成的。HAT与HDAC之间的 动态平衡控制着染色质的结构。曲古抑菌素A(Trichostatin供体细胞注射到去核卵母细胞的卵周隙内。采用针式电极 在显微操作仪上进行电融合。 A。TSA)是一种去乙酰化酶(HDAC)抑制剂。其通过抑制去乙 1．5 重构胚的激活及体外培养 融合后的重组胚在H— 酰基酶(HDACs)的活性来提高组蛋白的乙酰化程度。笔者探 讨了供体细胞经髑A处理12h的同时．研究在核移植后继 M199培养液中激活培养2～3h。在含5 pLmol／L离子霉素的 续用TSA处理12h对重构胚的囊胚发育率的影响。 l材料与方法 DMAP的培养液中孵育4h。孵育后洗3次再移人到35咖 1．1主要试剂DMEM培养液、M199培养液和胎牛血清。培养皿中的s0F∞培养液微滴中。将微滴放入38．5℃、5％ 均购自GIBCO公司：TrichostatinA、离子霉素、细胞松弛素 C02和饱和湿度条件的培养箱中培养，隔48h换液1次，第 72 B、透明质酸酶、胰蛋白酶和矿物油，均购自Sigma公司；抗 h后加入10％(v／v)FBS液继续培养。 乙酰化组蛋白H4K12抗体、偶联F