柱前衍生高效液相色谱法分析海洋褐藻多糖药物的糖醛酸组成.pdfVIP

HUAXUE)研究报告 第37卷 分析化学(FENXI 第5期 2009年5月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 648—652 柱前衍生高效液相色谱法分析 海洋褐藻多糖药物的糖醛酸组成 王金霞 赵峡‘ 于广利 李广生 郝翠 (中国海洋大学医药学院，教育部海洋药物重点实验室，青岛266003) 进行降解，再与l·苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行柱前衍生，建立了3种药物糖醛酸组成分析的高效液相色 谱方法。结果表明：PSS、PMS、PGS的最适降解条件：在110℃下降解6h，TFA浓度3 moL／L；最适衍生条件：反应 mol／L 温度70℃，反应90rain，PMP与供试品的摩尔比为12：l，NaOH与供试品的摩尔比为2：1；色谱条件为：0．1 磷酸盐(pH6．7)缓冲液一乙腈(82：18，v／v)。检测波长：245nm，流速：1mL／min。在此色谱条件下，甘露糖醛酸 方法具有良好的精密度和重现性，灵敏度高，适合于海洋褐藻多糖类药物的微量分析。 关键词海洋褐藻多糖，柱前衍生，高效液相色谱法，l·苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 1 引 言 褐藻酸是由口．D一甘露糖醛酸(mannuronicacid，M)和a—L-古罗糖醛酸(guluronicacid，G)组成的二元 线型嵌段化合物，是唯一在每个糖环中均含有羧基的天然海洋生物多糖…。抗心血管药物藻酸双酯钠嵋。 sodium glycol su]．fate，PSS)是褐藻酸的低分子硫酸酯衍生物，而降脂抗栓药物甘糖酯p1 (propylenealginate (polymannuronatesulfate，PMS)和抗尿路结石药物古糖酯H1(polyguluronatesulfate，PGS)是分别以聚甘露 糖醛酸(ploymannuronicacid，PM)和聚古罗糖醛酸(polyguluronicacid，PG)为主要原料的低分子硫酸酯衍 生物。由于M和G为C，差向异构体，使得这3种海洋褐藻多糖药物在结构和理化性质方面都十分相似。 如在3种药物的临床用质量标准中，定性鉴别项下的己糖醛酸和钠盐鉴别反应均呈阳性，而且三者的红外 光谱和醋酸纤维素薄膜电泳行为也较为相似；在含量测定项中也都是以硫(S)的含量进行折算1。因此， 目前的质量检测标准很难将3种药物加以准确区分。 由于糖类化合物一般缺乏特征的紫外吸收，为提高其在高效液相色谱(HPLC)检测中的灵敏度，常常 采用衍生的方法使其形成具有紫外或荧光吸收的衍生物。常用的糖类衍生化试剂主要有2一氨基吡啶冲。、 中PMP可以在温和的条件下与还原糖进行定量反应，且无立体异构产物，被成功应用于多糖化合物的单 糖组成分析一叫¨。本实验基于PSS、PMS和PGS的糖醛酸组成不同，先将3种药物降解为糖醛酸单糖，再 与PMP进行衍生和HPLC分离，建立了一种专属性强的适合这3种海洋褐藻多糖药物定性和糖醛酸组成 定量分析的方法，为其质量控制和提高药物临床疗效的稳定性提供了基础。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 mmx4．6 和Chemstations色谱工作站；EclipseXDB—C18色谱柱(150mm，5tim，美国Agilent公司)。 2008-09-22收穑；2008．12-15接受 本文系国家863计划项目(No．2007AA092445)资助 ·E-mall：zhaoxia@OUC．edu．cn 第5期 王金霞等：柱前衍生高效液相色谱法分析海洋褐藻多糖药物的糖醛酸组成 649 国海洋大学天然药物化学一室提供；其它试剂均为国产分析纯。 2．2实验方法