牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆.pdfVIP

第32卷第4期 水产学报 V01．32，No．4 2008年7月 OFCHINA July，2008 JOURNALOFFISHERIES 文章编号：1000—0615(2008)04—497—10 牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆 徐建勇L2， 陈松林1 (1．中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，山东青岛266071； 2．中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛 266003) 摘要：采用同源克隆及基因组步移的方法，分离克隆了牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因。 经过序列分析及cDNA验证，牙鲆MSTN基因具有3个外显子和2个内含子，编码377个氨 基酸。5’侧翼区含有8个TATA框，一个CAAT框，6个E框；3’侧翼区含有加尾信号。通过 同源分析，牙鲆MSTNC末端含有9个保守半胱氨酸残基和一个RVRR蛋白酶酶切位点；通 在胚胎发育中不表达或表达量较低，说明MSTN在牙鲆胚胎发育中并不起重要作用；其在各 组织中的表达，随个体和环境的不同而有差异，暗示MSTN的表达受外界因素调控。 关键词：牙鲆；肌肉生长抑制素；克隆 中图分类号：Q785；S917文献标识码：A 短须石首鱼(Umbrina 肌肉生长抑制素(myostatin，MSTN)基因， 斑鱼(Epinephelus 又称GDF8，是转录生长因子(TGF-p)家族的成 员之一。自1997年在小鼠中发现该基因[1]至今， 大量的实验证据表明该基因对哺乳动物骨骼肌的 因的蛋白酶酶切位点(RXXR)和C末端的半胱氨 发育和生长有负调控作用，该基因的缺失可导致 酸残基在不同的物种中都保持着高度保守[4]。 骨骼肌增生[2]。在小鼠中，通过基因敲除使 与其它的TGF-p家族的成员蛋白一样， MSTN基因C端生物活性区失活，从而使小鼠的MSTN以前体形式合成后被蛋白酶酶切，形成N 骨骼肌比普通野生小鼠增加了2～3倍[1’31；在牛端前肽和C端活性成熟肽[1．22。23|。酶切之后，前 和狗中，该基因的自然突变导致的基因失活，使其 肽与成熟肽仍以非共价结合的方式结合。MSTN 肌肉产量增加[4“3；在斑马鱼(Brachydanio前肽对于MSTN形成正确的二聚体极其重 rerio)中，MSTN基因的沉默可以导致肌肉数量 要[241；MSTN前肽还可以通过与成熟肽结合，从 和体积的增加[7’8]。到目前为止，除了在哺乳 5|。 而抑制MSTN与其受体结合，阻断其功能[2 类[9]和鸟类[10]上有MSTN的报道外，还有大量通过转基因表明，MSTN前肽可以抑制斑马鱼肌 鱼类MSTN基因被克隆：斑马鱼[11|，虹鳟肉生长‘11]。 在鱼类中，MSTNmRNA可以在肌肉、眼、 (Oncorhynchusmykiss)E123，大西洋鲑(Salmo 脑、肠、鳃、肾、心和脾中发现。尽管不同物种的表 salar)[13]，莫桑比克罗非鱼(Oreochromis americana)L15J， mossambicus)E14]，白鲈(Morone达谱存在差异，但在肌肉中都检测到了较高的表 saxatilis)[1 条纹石鲐(Morone 5I，金头鲷(Sparus aurata)E163，鲶(Ictalurus