猪单精注射转基因胚胎的体外培养与发育.pdfVIP

动物医学进展。2014，35(1)：1-6 in Medicine ProgressVeterinary 猪单精注射转基因胚胎的体外培养与发育 彭 旭，管迟瑜，苗洪伟，滕 云，顾春霞，芮 荣。 (南京农业大学动物医学院，{王苏南京210095) 摘要：为探讨建立卵母细胞胞浆内单精注射(ICSI)介导的猪转基因胚胎的体外培养与发育模式，本试 养液所获卵裂率、EGFP阳性胚胎率和囊胚发育率均无显著差异，PZM一3培养所获卵裂率和囊胚发育率略 对照组相比差异不显著，但处理组胚胎卵裂率反而显著低于对照组。在PZM一3培养液中添加25nmol／L TSA处理24 h组有所增加，且卵裂率和囊胚发育率 h，卵裂率、EGFPFEt性胚胎率、囊胚发育率均较处理12 略高于对照组，但差异不显著。 关键词：单精注射；转基因；胚胎；体外发育；猪 中图分类号：Q132．13 文献标识码：A 卵母细胞胞浆内单精注射(intracytoplasmic 鼠上的研究表明，要提高ICSI转基因效率，可对精 sperminjection，ICSI)是一种应用较为广泛的显微 受精技术，在生殖医学研究、治疗不育症及畜牧生产 子进行多种预处理，包括液氮反复冻融及TritonX一 应用和野生动物保护等方面，均具有很大的应用潜 100阴离子洗涤剂处理等，以至造成精子的膜损伤 力。借助ICSI技术，将目的基因与精子共孵育，再及核蛋白溶解。其原理是通过破坏精子质膜以提高 进行单精注射，有可能获得转基因动物。因此，该技 雄原核的形成，使精子中的因子能更容易作用卵母 术可为转基因动物研究开辟一条简易的技术路线。 细胞。ICSI介导的转基因，外源基因多以随机整合 目前，采用ICSI介导的方法已成功获得转基因恒河的方式重组到宿主基因组内，必然受到复杂因素和 猴、转基因小鼠和转基因猪，证实了该技术路线的有 机理的影响，包括外源基因的沉默[3]。外源基因的 效性。此外，应用冷冻精子进行ICSI转基因动物生沉默与表观遗传修饰关系密切，这就牵涉到组蛋白 产，有助于灵活掌握转基因动物生产的程序和时间。 乙酰化，而曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)是一 2006年，MoisyadiS等将反复冻融的猪精子与外源 种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可用于改变表观遗传 状态。已有试验表明用TSA处理猪核移植胚胎可 DNA(表达人血清白蛋白和增强型绿色荧光蛋白) 显著提高其体外发育与克隆猪生产，但TSA对猪 共孵育后，利用ICSI介导法成功构建200枚胚胎， 获得2头p／hALB—BAC转基因猪…。 ICSI转基因胚胎外源基因表达及胚胎体外发育的 ICSI技术虽已被应用于转基因猪生产，但其生影响，迄今未见相关的报道。本试验旨在探索改善 产效率较低。影响因素涉及：①ICSI转基因胚胎的ICSI转基因胚胎体外发育的方法，研究TSA对转 体外培养与发育；②以精子为载体的外源基因转染 基因胚胎发育的影响，为改进动物转基因技术提供 参考。 效率；③外源基因的整合与表达等。NCSU一23和 1材料与方法 PZM一3是目前应用于猪胚胎体外培养的2种主要培 养基，但它们培养不同来源猪胚胎的发育效果存在 1．1材料 差别。有研究表明，在体外成熟、体外受精、孤雌激 1．1．1猪卵母细胞采集与成熟培养 猪卵巢采自 活及体细胞核移植方面，PZM一3的胚胎培养效果比南京雨润食品有限公司屠宰场，收集的卵巢置于 收稿日期：2013-08—21 基金项目：博士学科点专项科研基金(20100097110008)；南京农业大学SRT项目(1217A07) 作者简介：彭 旭(