第三单元 KOD_Plus实例集.pdfVIP

KOD -Plus- 使用 PCR 等的代表性实例 TOYOBO CO., LTD. Biochemical Operations Department OSAKA JAPAN —目录— [1] KOD-PLUS-的特性 1 [2] PCR 反应的准备及条件 2 [3] PCR 实例 3 实例 1 KOD-Plus 与各种其它耐热性 DNA 多聚酶之间 PCR 可信度的比较 3 实例 2 使用 KOD-Plus 对高 GC 含量样品进行 PCR 扩增 5 实例 3 使用 KOD-Plus-进行 Site-directed mutagenesis 8 实例 4 使用 KOD-Plus-进行各类长链 PCR 11 实例 5 通过菌落直接法 PCR 对金黄色葡萄球菌进行基因特性分析 13 实例 6 使用含 KOD-Plus-的RT-PCR 试剂盒“ReverTra -Plus-TM ”进行基因扩增 15 实例 7 RT 反应液量对下一步使用 KOD -Plus-进行 PCR 时的影响 18 [4] 有关 KOD -Plus- 的问题与解答 20 [5] TOYOBO PCR 酶以及 RT-PCR 试剂盒目录 23 购买者须知 PCR （Polymerase Chain Reaction，多聚酶链反应）知识产权归 F. Hoffmann-La Roche Ltd.及 Hoffmann-La Roche Inc.所有，受美国专利号 4,683,195 、4,683,202 、4,965,188 及 5,075,216 保护。 I KOD -Plus-的特性 KOD -Plus- 是一种新型的高保真 PCR 试剂，它允许对各种目标物进行 PCR。KOD -Plus-是从日本 鹿儿岛县小宝岛上发现的硫质喷气孔中分离出来的 Thermococcus kodakaraensis KOD1 菌株（超耐热原 始菌）生成的 KOD DNA 多聚酶 1) 进行改良的品种。 在耐热 DNA 多聚酶 1)中，KOD DNA 多聚酶具有最高的 DNA 合成效率以及 PCR 保真度。但是，其 高校正功能可能会导致 PCR 过程中的一些问题。为此，我们已经根据最新的技术研制出了更优良的 PCR 试剂。特别是，添加了两种结合 KOD DNA 多聚酶的具有不同抗原决定部位的单克隆抗体以便提供更多的 解决方案，另外包括对缓冲液组成进行了改变。 因此，我们已将一种具有很高 PCR 性能的新型的高保真 PCR 试剂投放到了市场。KOD -Plus-主要 具有以下特性。 ● 高保真度 ● KOD -Plus-具有强 3→5核酸外切酶活性以及多聚酶活性，并因此提供了大约比 Taq DNA 多聚酶高 82 倍的保真度。 ● 高耐热性● KOD -Plus-对于各种 PCR 模板都很合适，某些 PCR 模板可能具有更高的高级结构并且某些 PCR 产物 需用来进行克隆。 ● 适合于“热启动”PCR● 在室温下多聚酶活性以及校正活性将受到抑制，并且通过两个单克隆抗体，PCR 反应之前由引物导致的 非特异性反应以及消化作用也将受到抑制。 此外，由于这些抑制作用是由抗体引起，所以其作用在首次循环中的变性阶段中将消失并从此不再抑制 随后的反应。 ● 可用于高 GC 含量的模板 ● 对模板很高的亲和性为扩增高 GC 含量的目标物提供了可能性。 ● 最佳的缓冲液组成 ● 对多种的目标物都可进行长链 PCR。 参考文献 1) Takagi, M., Nishioka, M., Kakihara, H., Kitabayashi, M., Inoue, H., Kawakami, B., Oka, M., and Imanaka, T. Appl. Environ. Microbiol., 63 : 4504-4510 (1997) - 1 - II PCR 反应的准备及条件 PCR 操作程序 1）PCR 反应混合液的配制 在配制 PCR 反应混合液之前