交叉配血聚凝胺法微柱凝胶法.pptVIP

交叉配血（聚凝胺法、微柱凝胶法） 临床血液教研室 交叉配血 交叉配血聚凝胺法： 操作步骤： 抽取受血者静脉血3～4ml，枸橼酸钠抗凝，以生理盐水洗涤受血者红细胞3次，配成3% 红细胞悬液，同样方法处理献血者样本； 取洁净小试管2支，1支标记为主侧管，另1支标为次侧管； 主侧管内加受血者血清2滴、献血者红细胞悬液1滴；次侧管加献血者血清2滴、受血者红细胞悬液1滴； 每管各加LIM溶液0.6ml，混匀，室温孵育1min; 每管各加2滴聚凝胺溶液，混合后静置15s; 1300g离心15s，倾去上清液； 轻轻摇动试管，目测细胞有无凝集，如无凝集，必须重做； 加入2滴重新悬浮液，并轻轻转动试管混合，肉眼观察结果，必要时用显微镜观察结果。 结果判断： 主侧管和次侧管内红细胞凝集在1min散开，则为聚凝胺引起的非特异性凝集，表示受血者和献血者配血相容。 如果主侧管和/或次侧管内红细胞凝集不散开，则表明两血不相容，献血者血液不可输注。 注意事项： 实验结果必须在3分钟内判读 在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。 微柱凝胶卡交叉配血试验 原理： 将受血者、献血者的血清和红细胞，放置主侧和次侧管的反应室中，放置37℃孵育器中孵育，如果血清中存在针对红细胞抗原的血型抗体（lgM型或IgG型）时，红细胞发生凝集，离心后留在微柱的表面，为阳性；如果血清中不含有针对红细胞膜上血型抗原的抗体，红细胞下沉到微柱管的底部，为阴性。 操作步骤： 按照试剂说明配制好献血者、受血者的红细胞悬液以及分离血清。 主侧：25ul 受血者血清 + 50ul 1%献血者红细胞，加入主侧管反应室内； 次侧： 25ul献血者血清+ 50ul 1%受血者红细胞，加入到次侧管反应室内； 加样后的试剂卡放置专用孵育器37℃孵育15min； 取出试剂卡，放置专用离心机1000g离心9min； 取出试剂卡，肉眼观察结果。 结果判断： 阴性结果：红细胞完全沉降于凝胶管底部。 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和（或）出现溶血。 * * 原理： 将红细胞和血清放置在低离子介质中孵育，可促进抗体和红细胞膜血型抗原结合，再加入聚凝胺促进红细胞非特异性凝集。离心后加入重悬液(电荷中和 )，正常红细胞的凝集解散，而抗体抗原结合引起的红细胞凝集仍然存在。 LIM:降低 溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云， 可促进抗体和红细胞膜血型抗原结合。 聚凝胺:高价阳离子,中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞 间距,促进红细胞非特异性凝集。 重悬液:电荷中和 。 *