高效毛细与管电泳(WY) .ppt

高效毛细管电泳 Capillary Electrophoresis, CE 电 泳 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 1808年，Reuss（俄国）首次发现电泳现象。 1937年，Tiselius（瑞典）用于人血清蛋白质混合液的分离： 发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪； 1948年，获诺贝尔化学奖； 经 典 电 泳 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率较低。 1981年，Jorgenson和Luckas，用75μm内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳。 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)，是指离子或带电粒子以毛细管为分离介质，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小，表面积和体积的比值大，易于散热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生，这是CE和传统电泳技术的根本区别。 采用了0.05 mm内径的毛细管； 采用了高达数千伏的电压。 高效毛细管电泳 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 采用了25-100μm内径的毛细管； 采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 毛细管电泳的柱效远高于HPLC，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 与传统的电泳相比，毛细管电泳的主要特点： 一、操作简便，可以自动化 二、高效，可以达到非常高的分离效率 三、快速，可以在毛细管两端加上高至30 kV的高电压 四、低耗，毛细管内径很小 五、廉价 六、毛细管电泳分离模式多样，功能强大，可以用于药物分析、药代动力学研究、手性分离及蛋白质、核酸分离、环境监测； 七、与高效液相色谱相比，毛细管电泳具有相当的抗脏能力 基本概念 毛细管总长度(L, cm) 毛细管有效长度(l, cm) 毛细管的入口端到检测窗口的距离； 迁移时间(t, min) 带电粒子在电场作用下做定向移动的时间； 电泳速度（v cm/s） 在单位时间内，带电粒子定向移动的距离； 电场强度(E, V/cm) 电压/毛细管总长度； 电泳淌度（μ cm2/(V·s) ）带电粒子在毛细管中定向移动的速度与所在电场强度之比； 1. 高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：输出电压稳定在±0.1%以内 （5）电源极性易转换，反向电压也是电泳分析时常常需要的。 2. 缓冲液池 1、化学惰性，不与样品发生破坏性作用； 2、不影响凝胶的寿命； 3、紫外吸收弱、电导率低； 4、缓冲容量尽可能大； 5、在空气中稳定。 3. 毛细管 毛细管是毛细管电泳的核心部件。 材料要求： 毛细管柱的材料应是化学和电惰性的， 紫外光和可见光均可以通过， 有一定的柔韧性，易于弯曲，耐用且便宜。 目前，主要采用的材料是聚四氟乙烯、石英和玻璃 聚四氟乙烯：电渗流可控制；散热差，对短波紫外光有较强吸收 玻璃：电渗强、紫外吸收强、机械性能差； 石英：它具有表面的金属杂质含量低，有电渗，吸附少等优点，各项性能好。 3. 毛细管 管径： 目前毛细管的管径为25～100μm，小管径毛细管具有以下优点： 首先是减小电流，从而减少自热。在同样电压下，管径越小，电流也就越小，产生的焦耳热也就越少； 再者，管径小，散热效果好。管径越小，表面积/体积比越大，散热效果越好。 缺点： 管径减小，表面积/体积比增大，不利于抑制吸附作用 管径小还会导致上样、清洗困难，使光程缩短，检测灵敏度降低。 因此，毛细管管径的下限受检测灵敏度的限制，其通常所使用的管径为25～100μm，常用的为50μm和75μm。 3. 毛细管 管长 在理想条件下，如果电场强度保持恒定，则分离度随着管长的增加而增加。 为了保持电场强度的恒定，在增加管长的同时还必须相应地增加操作电压。由于实际上电压的取值有一个极限，不能无限增大，因此，管长也不能无限增加。 通常长度=1m。 3. 毛细管 添加剂 聚乙烯醇改性管壁可完全抑制电渗，防止高极性的，特别是碱性蛋白质粘附； 用带羟基的，特别是可电离的碱性聚合物改性，可使电渗流较减