八昆虫病原细菌的利用.ppt

3、苏云金芽孢杆菌的类群 根据营养细胞鞭毛抗原的血清学反应及其它特性，苏云金芽孢杆菌可划分为40个血清种和54个血清型亚种。到目前为止，已发现苏云金芽胞杆菌的伴孢晶体蛋白至少对脊椎动物中4个门和节肢动物门中9个目的有害生物有活性。1977年从以色列分离到血清型H-14，对蚊、蚋、白蛉幼虫有速效，无残效，但对蠓类和家蝇幼虫无作用；少数苏云金杆菌产生外毒素（exotoxin）血清，对家蝇亦有毒性。 4、苏云金杆菌不同变种或菌株对昆虫的致病性和毒力的差异 苏云金杆菌的不同变种对昆虫的毒力差异很大。属于不同血清型的变种或具有相同血清型的不同变种的寄主范围是不同的。 即使是苏云金杆菌类群中的同一个变种，不同的菌株对昆虫的毒力差异也可以很大。毒力的大小与产生的毒素有关，也与细菌的致病机制和寄主昆虫的特异性有关。这对工业生产中有效菌株的选择以及高毒力或其他特异性菌株的选育具有重要意义。 5、苏云金杆菌的培养特征 苏云金杆菌对营养的要求不严，能在常用的细菌培养基(如牛肉膏蛋白胨培养基)中生长快而旺盛、并形成芽孢和伴孢晶体。在以黄豆饼粉、棉子仁粉、玉米浆等农副产品为主要养料的深层发酵中进行大量培养，每ml发酵液活芽孢数可达20~150亿(大致有同等数量的伴孢晶体)。发酵液加填充料经板框压滤浓缩后，用喷雾干燥法制成菌粉，或将发酵液浓缩(离心或真空减压浓缩)后，加助剂制成液剂、乳剂或油剂。苏云金杆菌制剂亦可用半固体发酵法进行生产。 （二）苏云金杆菌的毒素和致病机理 苏云金杆菌对昆虫的致病作用主要通过昆虫食入菌剂而引起。菌剂包括芽孢和细菌所产生的毒素。菌体本身的繁殖可导致害虫的死亡，而昆虫能在短时间内死亡往往是苏云金杆菌产生的毒素所致。苏云金杆菌对多种昆虫能引起发病而死，但对另一些昆虫则致病力很差，甚至没有作用。该类细菌的杀虫作用及其有效范围与致病机制和昆虫寄主密切相关。 1、苏云金杆菌的毒素 苏云金杆菌产生的毒素分为两大类：一类是内毒素，即伴孢晶体内所含毒素；另一类是外毒素，是细菌在生长过程中分泌在菌体外的代谢产物。苏云金杆菌所产生的毒素主要是β外毒素和δ内毒素。 （1）甲体外毒素（α-exotoxin） 是一种能被热破坏的（120℃，20min）蛋白质，在菌体培养对数期的后期时，先于芽孢和晶体的形成产生。口服能使某些害虫中毒。苏云金杆菌类中的不少变种能产生这种外毒素。 （2）乙体外毒素（ β-exotoxin） 又称热稳定外毒素、蝇毒素，能忍耐121℃(15min)的高温和对家蝇幼虫有毒性。苏云金素是广谱毒素，对较多目的昆虫有毒性。β外毒素是一种腺嘌呤核苷酸衍生物，相对分子量约为700，它是苏云金芽孢杆菌在一定培养条件下所产生的细胞外毒素，可溶于水，热稳定性好，经高温高压处理后仍能保持毒性。 热稳定外毒素包含两种核苷酸衍生物，为苏云金素A (thuringiensin A)和苏云金素B (thuringiensin B)。菌素B是菌素A的r-内脂，菌素A加热失水而成B，而菌素B可由碱水解而成A。对家蝇毒力A大于B约8倍。 （3）丙体外毒素（γ-exotoxin） 是一种（或多种）未经鉴定的酶，能使卵黄琼脂变清（例如见于杀虫变种）。 （4）丁体内毒素（δδ-endotoxin） 通常又被称为伴孢晶体（Parasporal crystal）、伴孢晶体包含体（ Parasporal crystal inclusion body）、晶体蛋白（Crystal protein）、晶体毒素（Crystal toxin）、杀虫晶体蛋白（Insecticidal crystal protein，ICPs ），是苏云金杆菌具有杀虫性能的主要毒素。但晶体蛋白须在昆虫中肠碱性条件下经蛋白酶的消化作用裂解为有作用部分和无作用部分，只有有作用的部分或核心才能算丁体内毒素。 ●① 晶体毒素的形成和形态 晶体与芽孢同时形成，其主要成分是蛋白质。晶体的形成与芽孢的形成有密切关系。如能抑制芽孢形成的化合物如醋酸氟也能抑制晶体的形成，但二者的形成又是相对独立的。如在低温（14~15℃）培养条件下不能形成芽孢，但晶体仍能产生。 ●② 伴孢晶体的成分 B.t.的伴孢晶体包涵体中含有一或多种杀虫晶体蛋白 （Insecticidal crystal protein,ICPs ），按一定方式聚合成晶体结构，包括二聚体亚单位的多肽，多肽链中的半胱氨巯基大多处于分子表面，与相邻亚单位形成二硫键共价聚合的形式使原毒素（Protoxin）蛋白包容在伴孢包涵体中呈稳定的结构。