十毛细管电泳.ppt

* 第十二章毛细管电泳分析法 第一节 概述 1981年，Jorgenson和Luckas，用75μm内径玻璃毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳。 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 1983年H.Jerten把凝胶电泳引入到毛细管电泳中。 1984年Terabe等把胶束电泳技术引入到毛细管电泳中，为今后发展新型的毛细管电泳分离模式提供了依据。 1989年在胶束电动毛细管色谱模式的体系中，加入手性拆分试剂，实现了对映体的拆分。 1988-89年,出现了第一批毛细管电泳的商品仪器。 HPCE的优点： (1) 分离效率高，毛细管中心与外界的距离很短，电泳产生的焦耳热很快被散去，有效防止电泳条带的扩散。 (2) 检测灵敏度高，以样品的绝对量表示。用激光诱导荧光检测器灵敏度可达10-19g (3) 样品用量少 (4) 仪器结构简单，操作方便，环境友好。 第二节 毛细管电泳的基本原理 一、电泳：指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度 qE = fν q—离子所带的有效电荷；E —电场强度；ν—离子在电场中的迁移速度；f —平动摩擦系数 ( 对于球形离子： f =6πηγ；γ —离子的表观液态动力学半径；η —介质的粘度； ) 溶质在给定的缓冲液中，单位时间在单位电场下移动的距离 二、电渗现象与电渗流 1.电渗流现象 当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层，二者之间存在电位差。 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。 νEOF= εξ E/η 2. HPCE中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质 3. HPCE中电渗流的流形 4. HPCE中电渗流的作用 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍； 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ν+ =ν电渗流 + ν+ef 阳离子运动方向与电渗流一致； ν- =ν电渗流 - ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反； ν0 =ν电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致； （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 在HPCE中，控制电渗流非常重要。 三、HPCE中影响电渗流的因素 1.电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。 2.毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同。 3. 电解质溶液性质的影响 （1）溶液pH的影响 （2）阴离子的影响 （3）离子强度的影响 * 4. 温度的影响 毛细管内温度的升高，使溶液的黏度下降，电渗流增大。 温度变化来自于“焦耳热”； 温度每变化1，将引起背景电解质溶液黏度变化2%～3%； 5. 添加剂的影响 （1）加入浓度较大的中性盐，如K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液的黏度增大，电渗流减小。 （2）加入表面活性剂，可改变电渗流的大小和方向； 加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。 加入阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁表面负电荷增加，zeta电势增大，电渗流增大； 四、淌度 1.绝对淌度(absolute mobility)μab 无限稀释溶液中带电离子在单位电场强度下的平均迁移速度，简称淌度。可在手册中查阅。 2.表观淌度 μap 离子在实际分离过程中的迁移速度（表观迁移速度）： νap=μap ? E 五、HPCE中的参数与关系式 1.迁移时间（保留时间） HPCE兼具有电化学的特性和色谱分析的特性。有关色谱理论也适用。 2.分离效率（塔板数） 在HPCE中，仅存在纵向扩散，σ2=2Dt 扩散系数小的溶质比扩散系数大的分离效率高，分离生物大分子的依据。 由此可得某离子的表观趟度 3.分离度 分离度可按谱图直接由下式计算： 六、影响分离效率的因素—