HBVX蛋白结合共同转录因子ⅡB的研究.doc

HBV X蛋白结合共同转录因子ⅡB的研究 中华传染病杂志 1999年第3期第17卷 论著 作者：杨益大　马亦林　郑临　村上清史 单位：杨益大、马亦林、郑临　310003　杭州，浙江大学附属第一医院；；村上清史　日本金泽大学肿瘤研究所 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白；共同转录因子ⅡB；结合 　　【摘要】　目的　研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBV X蛋白)能否结合共同转录因子ⅡB(TFⅡB)。方法　应用体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down试验)和Far-Western Blot试验，以及细胞内联合免疫沉淀试验。结果　HBV X蛋白能直接与普通TFⅡB结合。HBV X的X199(51-99)是结合TFⅡB的最小基团。研究还证实土拨鼠肝炎病毒X蛋白(WHX)同样能与TFⅡB结合。细胞内联合免疫沉淀试验更进一步证实了体外蛋白与蛋白结合实验的结果。结论　嗜肝DNA病毒X蛋白与TFⅡB结合是其发挥反式转录激活作用的机制之一。 Study on the binding of HBV X protien to the general transcription factor ⅡB YANG Yida, MA Yilin, ZHEN Lin, et al. 　　Department of Infectours Diseases, The First Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310003 　　【Abstract】　Objective　To study the binding of HBV X protein(HBV X) to the general transcription factor ⅡB(TF ⅡB).Methods　Pull-Down assay in vitro, Far-Western Blot assay and Co-Immunopreci-pitation assay in vivo were used to detect the binding of HBX protien to TF ⅡB.Results　It was found that HBX binded TF ⅡB directly and HBV X 199(51-99)is the minimal domain responsible for the binding to TF ⅡB. Furthermore, the binding of TF ⅡB-HBX in vitro was confirmed by intracellular co-immunoprecripition assay. It was also found that the woodchuck hepatitis virus X protien (WHX) was to bind TF ⅡB.Conclusion　These RE results suggest that the interaction between HBX and TF ⅡB maybe of the mechanisms which account for its transcription activity. 　　【Key words】　Hepatitis B virus X protein　　General transcription factor ⅡB　　Binding 　　乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码相对分子质量为17 000的X蛋白(HBV X蛋白)，具有反式转录激活作用，能广泛激活病毒和细胞的启动子的转录，在HBV复制，感染以及慢性HBV感染所致肝细胞癌(HCC)中均有十分重要的作用［1］。已报道的HBX结合蛋白有RNA聚合酶Ⅱ(RNA Pol Ⅱ)亚单位RPB5、TATA反应元件结合蛋白(TBP)及共同转录因子TFⅡB［2，3］等。HBX是通过与这些因子以及许多未知的蛋白结合参与了转录的调节。共同转录因子ⅡB(TF ⅡB)是RNA PolⅡ转录起始复合物(PIC)中的重要成分，它与TBP结合组成了PIC最基本结构；而且RNA PolⅡ与TFⅡB结合后才能进入PIC发挥其功能；同时TFⅡB又是许多具有转录活性的病毒蛋白如单疱疹病毒的VP16、EB病毒的EBNA-2、猴病毒的大T抗原等结合的靶蛋白［4］，在转录调节中有重要作用。我们用不同的方法证实HBV的HBV X蛋白也能结合TFⅡB，现将结果报道如下。 　　材料与方法 质粒构建 　　大肠杆菌表达质粒pGENK1购自Stragagene公司，表达谷胱苷肽S转移酶(GST)融合蛋白。本实验所有的GST融合蛋白中含有能被cAMP依赖蛋白激酶磷酸化部位。HBV X蛋白全长和截