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第六章 种子扩大培养 生物工艺学 第六章 种子的扩大培养 种子扩大培养的概念:种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 种子扩大培养的目的与要求 第二节 种子制备过程举例 2. 一级种子（摇瓶） 3、二级种子（种子罐） 种子的质量要求： 108～109cfu/mL。（菌数） 大小均匀，呈单个或八字排列。（菌体） pH 7.0～7.2时结束。（性能） 活力旺盛。（活力） 二、青霉素生产的种子制备 1、斜面孢子 2、大米孢子 3、一级种子 种子的质量要求 第三节 种子制备的技术概要 二、实验室阶段 2、培养基选择的原则 3、起始接种物的传代问题 三、生产车间阶段 2、培养基选择的原则 例：柠檬酸发酵 3、发酵级数的确定 发酵级数确定的依据 4、接种量的确定 青霉素发酵罐生产工艺的改进 5、种龄 6、种子的质量要求 7、影响种子质量的因素 原材料质量 培养条件 温度 湿度 通气量 斜面冷藏时间 不同接种量影响菌体的生长和发酵 表1 种罐种子液的接种量试验结果 （发酵指数以接种量10％为对照） 100 102.1 102.1 102.5 101.4 42 36 32 30 28 10 15 20 25 30 发酵指数 到达40％菌浓度的发酵周期（h） 接种量（％，v/v） 发酵前期发酵液作为种子，发酵指数明显提高，发酵后期菌体自溶明显，影响提炼收率。 表2 种源对发酵提炼生产的影响 （以种罐种子液的生产指标作对照） 100 103.1 100 97.1 100 106.2 种罐种子液 发酵罐前期发酵液 发酵提炼的生产指数 提炼收率（％） 发酵指数 种源 20%种子罐＋10%发酵罐前期发酵液效果最好 表3 两种种源混合接种时的试验结果 （以接种量为20％的种罐种子液的生产指标作对照） 106.2 98.7 104.8 106.2 99.3 105.5 106.7 98.1 104.7 105.1 98.3 103.3 105.4 97.1 102.3 102.9 97.4 100.2 发酵指数 提炼收率（％） 发酵提炼的生产指数 35 20 15 30 20 10 30 15 15 25 15 10 25 10 15 20 10 10 总接种量（％） 种罐接种量（％） 发酵罐接种量（％） 种龄：是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 镜检：24h，多个杆菌首位相连成线形，处于繁殖旺盛期30h开始出现芽孢。 表4 菌龄对产酶的影响 62.37 66.12 74.55 52.10 72 56 48 60 12 18 24 30 酶活力（U/mL） 发酵时间（h） 菌龄（h） 量：要求达到一定的浓度。 质: 菌丝形态、培养液外观 （生长处于某个阶段、均匀等等） 理化指标：C、N、P的含量，pH 值，酶活等。 无污染（无杂菌） * * 第一节 种子扩大培养的目的与要求 第二节 种子制备实例 第三节 种子制备的技术概要 第一节 种子扩大培养的目的与要求 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求： 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求。 生理状况稳定，个体与群体。 活力强，移种至发酵后能够迅速生长，迟缓期短。 无杂菌污染。 保持稳定的生产能力。 一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养 →发酵 1、斜面培养 培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0～7.2。 培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细 培养条件：32℃，生长18～24h。 生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次。 培养条件：于1000mL三角瓶中，装液200～ 250mL，32℃培养12h。 培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5％ K2HPO4 0