MAPK在骨髓间充质干细胞信号转导机制中的作用.pdfVIP

提 要 近年来随着干细胞领域研究的不断深入，为探索神经细胞变性和（或）损伤性疾 病的治疗提供了新的思路。骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells， BMMSCs)具有多向分化潜能，其中，BMMSCs 向神经样细胞分化的途径和机制等方面 的研究目前已成为成体干细胞领域的研究热点之一。促分裂素活化蛋白激酶 （mitogen-activated protein kinases , MAPK ）是神经细胞内参与细胞增殖、分化、凋亡等 重要生命活动的一种信号转导蛋白，与神经发育和再生密切相关，因此明确 MAPK 信 号转导通路在 BMMSCs 向神经样细胞分化过程中的作用对于洞悉干细胞的定向转分化 机制具有重要意义。 本研究综合运用贴壁筛选法获得了较为均一的 BMMSCs ，并应用脑源性神经营养 因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF ）成功将BMMSCs 诱导分化为具有典型神 经细胞表型的神经样细胞，而且在诱导分化过程中，MAPK 信号转导通路中比较重要的 一个分支——胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK ）信号通路 被激活，并持续高表达。如果在使用诱导剂前加入 MEK 特异性抑制剂 U0126 ，则ERK 蛋白活性被抑制，即 p-ERK 相关信号转导通路被抑制，从而导致 BMMSCs 不仅在形态 上没有发生明显变化，同时也未检测到神经细胞再生的特异性标志物：生长相关蛋白－ 43 （growth associated protein, GAP-43 ）。 通过上述研究证明在体外 BMMSCs 能够被 BDNF 成功诱导分化为神经样细胞，并 且在此诱导分化过程中，MAPK ／ERK 信号转导通路发挥着重要作用，激活 MAPK ／ ERK 信号通路将会诱导 BMMSCs 向神经样细胞分化，抑制该信号通路后 BMMSCs 向 神经细胞的转分化能力将有所减弱。研究结果对于进一步探索干细胞定向转分化机理和 可应用于临床的细胞治疗方法奠定了理论基础。 I 中文摘要 MAPK 在骨髓间充质干细胞信号转导机制中的作用 前言： 目前眼科领域内存在多种致盲性眼病，如缺血性视神经病变、视神经炎、糖尿病性 视神经病变以及视神经萎缩等，至今仍未发现确实有效的治疗措施。视神经和（或）视 网膜神经细胞的损伤和变性是这些眼病共同的致病因素。因此，保护视神经和促进神经 细胞再生即成为治疗此类疾病的关键环节。近年来对干细胞技术的深入研究，为治疗此 类眼病提供了新途径。 骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells ，BMMSCs ）源于胚胎早 期发育的中胚层，是成体骨髓中的一种多能非造血干细胞，具有很强的自我复制和多向 分化潜能。通常情况下，BMMSCs 可分化为中胚层来源的软骨细胞、骨细胞、脂肪细 胞等，但是有研究发现 BMMSCs 也能够分化为内胚层来源的肌细胞、肺细胞、肠上皮 细胞及外胚层来源的上皮细胞、神经细胞等。近年来，有关 BMMSCs 向神经样细胞诱 导分化方面的研究受到了极大关注。研究证实 BMMSCs 在适宜诱导剂的作用下可转分 化为神经样细胞，但具体机制至今仍在探索中。因此，我们希望能够阐明其具体机制， 从而得到大量细胞工程化的神经种子细胞，以用于相关疾病的治疗。 目的： 旨在探讨在BDNF 诱导BMMSCs 向神经样细胞分化过程中MAPK 相关蛋白 ERK 、 P38 和 JNK 的作用，为进一步研究BMMSCs 向神经样细胞分化的机制提供帮助。 材料和方法： 综合贴壁筛选法及控制胰酶消化法可对大鼠 BMMSCs 进行有效的体外分离和培 养，并应用流式细胞术和细胞免疫荧光法对所培养细胞进行鉴定。应用 MTT 法测量并 绘制细胞生长曲线。由 BDNF 诱导分化 BMMSCs ，应用细胞免疫荧光方法检测诱导后 神经细胞特异性标志物 nestin 、