miR-34c在小鼠精原干细胞体外分化过程中的作用.pdfVIP

Classification code: Q28 University code: 10712 UDC: 576 Postgraduate number: 2010051792 Confidentiality level: Public Thesis for Master’s Degree Northwest A ＆F University in 2013 STUDY ON ROLES OF MICRORNA-34C IN THE DIFFERENTIATION OF MOUSE SPERMATOGONIAL STEM CELLS IN VITRO Major: Cell biology Research field: Animal cell engineering Name of Postgraduate: Yu Meng Adviser: Hua Jin-lian Date of submission: May, 2013 Yangling Shaanxi China 本研究由 国家自然科学基金资助项目 , 教育部博士点基金 (RFDP,20120204110030), 教育部新世纪优秀人才支持计划 (No.NCET-09-0654) 提供资助 This Project was supported by National Natural Science Foundation of China (No., Doctoral Fund of Ministry of Education of China (RFDP, 20120204110030), the Program for New Century Excellent Talents of State Ministry of Education (NCET-09-0654) miR-34c 在小鼠精原干细胞体外分化过程中的作用 摘 要 在动物体内，干细胞持续更新分化产生的各类型终末分化细胞对维持组织器官的功 能有着至关重要的作用。哺乳动物睾丸中的精原干细胞 (SSCs)持续分化产生精子这一 过程贯穿于雄性个体生长发育的整个时期，可以说SSCs是种系维持和遗传进化的一个桥 梁和枢纽。SSCs不仅可作为再生性治疗的优良种子细胞，也是成体干细胞研究的良好体 外模型。微小RNA (microRNAs)在多种组织器官细胞的基因调控中发挥重要的作用，包 括细胞自我更新、分化、增殖及凋亡，同样也是干细胞的重要调控因子。miR-34家族中 的miR-34c ，在细胞内的多个过程中都有作用，对精子发生过程也有重要的调控作用。 Nanos是一类进化保守的RNA结合蛋白，在生殖细胞发育中发挥功能，包括原始生殖细 胞和生殖干细胞。在小鼠中，Nanos2在SSCs中表达，在精子发生过程中具有维持干细胞 多能性的作用。本研究以miR-34c作为研究对象，预测发现Nanos2是miR-34c 的靶基因之 一，构建其双荧光素酶报告基因载体及双荧光素酶报告基因突变载体验证靶基因，通过 在分离的原代及传代SSCs中转染合成的miRNA模拟物、抑制物，及使用含有miR-34c慢 病毒颗粒转导小鼠的曲细精管，检测、分析生殖细胞分化特异性标志基因的变化，深入 研究了miR-34c对生殖细胞分化特异性标志基因的调控作用，研究结果证实miR-34c可能 会通过靶向Nanos2 以促进SSCs的分化。