Nramp1基因的克隆及其在羊胎儿成纤维细胞和转基因小鼠中的表达鉴定研究.pdfVIP

  本研究得到国家科技重大专项抗布鲁氏杆菌病转基因羊新品 种培育（课题编号：2011ZX08008-005 ）项目资助 This work was supported by the project of National Science and Technology Major Projects Production of transgenic sheep with the resistance to brucellic disease （No. 2011ZX08008-005 ）   内容提要 巨噬细胞天然抵抗力相关蛋白基因（Natural Resistance associated Macrophage Protein 1 gene, Nramp1 ）也被称作Slc11a1 基因，在小鼠中对细胞内病原体的抵 抗起着关键性的作用，如各种沙门氏菌（Salmonella ）血清型、分枝杆菌 （Mycobacterium lepraemurium ）、胞内分枝杆菌（M. intracellulare ）、牛分枝杆菌 （M.bovis ）和杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani ）等。Nramp1 蛋白在巨噬 细胞中主要表达在吞噬溶酶体膜上，在感染的早期阶段通过其阳离子运输功能限 制胞内病原的增值，以增强巨噬细胞抵抗病原体的能力，它可以改变巨噬细胞内 部的铁代谢，包括使细胞质的含铁量减少，增强细胞铁输出，来限制胞内菌对铁 的利用。Nramp1 也被证明参与巨噬细胞吞噬红细胞时铁的回收利用。同时它还 参与一些免疫信号通路活性的调节，如由增加抗菌效应分子的产生（如 ROS 和 RNS ）或通过Nramp1 降低IL-10 的表达促进NO 的产生。 山羊Nramp1 基因全长 1647bp，定位于山羊 2 号常染色体长臂 q12.2 。在各 个组织中，Nramp1 主要分布于脾脏和肝脏，在其他组织中表达量很少或没有表 达，其中，脾脏的表达量最高。本研究通过提取山羊脾脏总 RNA ，经 RT-PCR 获得 Nramp1 基因序列，将其插入真核表达载体 PcDNA3.1(+) ，构建重组质粒 PcDNA3.1(+)-Nramp1 ，将线性化的质粒转染羊胎儿成纤维细胞，筛选获得阳性 细胞克隆，在基因组和 RNA 水平对细胞系进行检测，获得阳性细胞系两株。同 时用原核注射的方法将载体注入小鼠 0.5d 受精胚胎，通过胚胎移植获得转基因 小鼠，对转基因小鼠进行基因组和 RNA 水平检测，获得阳性转基因小鼠两只， 对转基因小鼠 Nramp1 的组织分布进行检测，结果表明该基因在心、脾、肺、肾、 睾丸、肌肉、鼠尾等组织均有表达，在肝脏表达量很少或没有表达。   中文摘要 Nramp1 基因的克隆及其在羊胎儿成纤维细胞和转基因小鼠中的表达 鉴定研究 巨噬细胞天然抵抗力相关蛋白基因（natural resistance-associated macrophage protein1 ，Nramp1 ）也被称作 Bcg/Lsh/Ity 基因或溶质转运蛋白 1 基因（solute carrier 11 a1,Slc11a1 ）。较早的研究表明，人类肺结核和麻风病的易感性可能与人类基因 组中某一基因的控制有关。最近的研究表明， Nramp1 基因多态性不仅与肺结核 和麻风病的易感性有关，并可能与类风湿关节炎的发病机制相关。除了抗病性强， Nramp1 基因家族的几个成员也参与肠道的铁运输。Nramp1 蛋白特异表达于巨噬 细胞溶酶体膜上。虽然通过抗原的荧光分析表明 Nramp1 蛋白在小鼠和其他几个 物种中的抗胞内菌感染机制尚不明确，但它可能通过调节巨噬细胞内二价阳离子 的浓度限制细胞内细菌的复制。 现代畜牧业中，动物的重大疫病是影响现代畜牧业发展的主要限制因素，例 如牛羊的布鲁氏菌病，而羊作为我国畜牧业的主要食用动物之一，其肉、毛、奶 都具有很高的实用