miR-142-3p对小鼠乳腺发育和泌乳重要功能基因Prlr的表达调控.pdfVIP

目 录 目 录 中文摘要I 英文摘要Ⅲ 1.前言 1 1.1 miRNAs 的研究进展 1 1.2.1 miRNAs 的发现和命名 1 1.2.2 miRNAs 的生物学特征 1 1.2.3 miRNAs 的生成过程及其作用机制 1 1.2.4 miRNAs 的检测技术 2 1.2.5 miRNAs 的鉴定和靶基因的预测 3 1.2 乳腺的发育 4 1.3 miRNA 与乳腺生物学 5 1.4 miR-142-3p 的研究进展 5 1.5 PRLR 及其生物学意义 6 1.6 研究的目的和意义 6 2.材料与方法 7 2.1 实验材料 7 2.2 主要仪器和设备 7 2.3 主要试剂和耗材 7 2.4 实验方法与步骤 8 2.4.1 miR-142-3p 靶基因的预测 8 2.4.2 miR-142-3p 及其预选靶基因在小鼠乳腺发育各时期中的表达 8 2.4.3 小鼠乳腺上皮细胞的培养及鉴定10 2.4.4 miR-142-3p 靶基因的验证 11 2.4.5 质粒共转染及报告基因载体的验证14 2.4.6 miR-42-3p mimics 对小鼠乳腺上皮细胞的影响15 2.4.7 miR-142-3p inhibitor 对小鼠乳腺上皮细胞的影响18 2.5 数据处理19 3.结果与分析20 3.1 miR-142-3p 靶基因的预测结果20 3.2 miR-142-3p、Prlr 在小鼠乳腺发育、泌乳及退化过程中的表达20 3.2.1 各时期小鼠乳腺组织RNA 质量检测20 3.2.2 miR-142-3p、Prlr 在小鼠乳腺发育、泌乳及退化过程中的表达21 3.3 小鼠乳腺上皮细胞的培养及鉴定22 3.4 miR-142-3p 靶基因Prlr 的构建与鉴定22 Ⅰ 3.4.1 miR-142-3p 结合位点及突变位点示意图22 3.4.2 报告基因载体的构建与鉴定23 3.5 miR-142-3p 基因超表达对小鼠乳腺上皮细胞的影响25 3.5.1 qRT-PCR 检测 miR-142-3p mimics 转染后小鼠乳腺上皮细胞中miR-142-3p、Prlr 及下游信 号通路基因的表达26 3.5.2 miR-142-3p mimics 对小鼠乳腺上皮细胞PRLR 及下游信号通路蛋白的影响27 3.5.3 miR-142-3p mimics 对小鼠乳腺上皮细胞增殖能力及活性的影响28 3.5.4 miR-142-3p mimics 对小鼠乳腺上皮细胞酪蛋白分泌的影响29 3.5.5 miR-142-3p mimics 对小鼠乳腺上皮细胞甘油三酯分泌的影响29 3.5.6 miR-142-3p mimics 对小鼠乳腺上皮细胞乳糖分泌的影响30 3.6 miR-142-3p 基因沉寂对小鼠乳腺上皮细胞的影响30 3.6.1 qRT-PCR 检测miR-142-3p inhibitor 转染后小鼠乳腺上皮细胞中miR-142-3p、Prlr 及下游信 号通路基因的表达30 3.6.2 miR-142-3p inhibitor 对小鼠乳腺上皮细胞PRLR 及下游信号通路蛋白的影响32 3.6.3 miR-142-3p inhibitor 对小鼠乳腺上皮细胞增殖能力及活性的影响33