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人 INO80 染色质重塑复合物在DSB 修复过程中的作用 Role of human INO80 chromatin remodeling complex in DSB repair process 作者姓名：杨洋 专业名称：生物工程 指导教师：蔡勇 教授 金景姬 教授 学位类别：工程硕士 论文答辩日期：2013 年5 月30 日 摘 要 DNA 双链断裂（DSB）是最严重的 DNA 损伤。一些化学试剂，如喜树碱 （Camptothecin，CPT），羟基脲（Hydroxyurea，HU）或电离辐射（ionizing radiation， IR）等物理化学刺激都可以导致 DNA 复制过程受阻，复制叉倒退，最终造成 DNA 双链断裂。hINO80 作为细胞内重要的染色质重塑复合物，参与了多种细胞进程， 如转录调控、DNA 复制、细胞分裂以及 DNA 双链断裂修复等。当细胞受到外界刺 激造成 DSB 后，H2AX 被磷酸化成为-H2AX，并且被募集到损伤位点。随着修复 过程的持续进行，-H2AX 会去掉磷酸化恢复成为 H2AX。通过免疫荧光染色实验 （Immunofluorescence，IF）我们观察到了这一过程，并欣喜地发现，hINO80 可以 和-H2AX 在损伤位点共定位。为了证实 hINO80 可能参与了 DSB 修复过程，我们 利用 siRNA knockdown 技术，进一步验证了 hINO80 复合物的亚基之一 Arp8 参 与 DSB 修复的过程。当敲除 Arp8 以后，hINO80 不能与-H2AX 在损伤位点共定位， 并且通过 Comet Assay 证实 Arp8 的缺失造成细胞不能进行正常的 DSB 修复。我 们的实验结果提示，hINO80 复合物在 DSB 修复过程中起着重要的作用。 关键词： 染色质重塑复合物 hINO80 复合物 DNA 双链断裂 DNA 损伤修复 I Abstract DNA double strand break （DSB ）is the most serious type of DNA damage.DSB can be generatedd by some physical or chemical factors such as camptothecin(CPT), hydroxyurea(HU), ionizing radiation(IR),and fork collapse. hINO80 is one of the most significant Chromatin remodeling enzymes.It is involved in many cell programs,such as regulation of transcription,DNA replication,cell division and DNA double strand break repair.In human cells ,H2AX was phosphorylated into -H2AX during DSB repair and recruited to the DSB sites.When the repair is completed, -H2AX can