抗亚洲I型口蹄疫病毒单链抗体的表达与纯化.pdfVIP

Secrecy: No. Chinese Academy of Agricultural Sciences Dissertation Expression and Purification of Anti-Foot-and-Mouth Disease Virus Asia ⅠType Single-Chain Variable Fragment Ms.Candidate： Xiaoxia Zhang Advisor ：Professor Junwu Ma Degree：Master of Veterinary Specialty: Veterinary Chinese Academy of Agricultural Sciences June 2013 摘 要 单链抗体 （single-chain variable Fragment，scFv）主要是从杂交瘤细胞、免疫小鼠的脾细胞和 人的 B 淋巴细胞获得。scFv 是由重链可变区和轻链可变区构成的非共价二聚体，可以用来构建重 组 scFv 抗体。首先，从杂交瘤细胞 （或脾细胞、淋巴细胞、骨髓）分离 mRNA，经反转录合成 cDNA，以cDNA 为模板进行抗体基因 PCR 。通过这种方法，建立了含有不同种类 VH 和 VL 基 因的抗体库。单链抗体结构包括重链可变区 （VH）和轻链可变区 （VL），VH 和 VL 通过一段柔 性肽连接，使得 scFv 能在 E.coli 中表达成具有功能性的蛋白，这种结构增加了 scFv 的高亲和力 和特异性。 实验将构建的口蹄疫病毒 scFv 基因与 T7Select 10-3b 载体连接，经体外包装，BLT5403 菌株 增殖，文库扩增，进行体外亲和筛选，建立了 T7 噬菌体 cDNA 展示文库。扩增核糖体展示筛选 的 scFv 基因 ，将目的片段与真核表达载体 pEGFP-N1 连接 ，构建融合真核表达载