拟南芥CDKG1参与花药发育中包括CalS5基因pre-mRNA的剪接.pdfVIP

论文题目：拟南芥 CDKGl 参与花药发育中包括 CalS5 基因 pre-mRNA 的剪接 学科专业：生物化学与分子生物学 学位申请人：牛谨 指导教师：张森 中文摘要中文摘要 中文中文摘要摘要 CDK，即周期蛋白依赖的蛋白激酶，最早发现是通过转录调控参与细胞周期 进程的调控。在此项研究中，我们发现拟南芥众多 CDK 中的一员--CDKG1 ，参与 CalS5 基因的前体 mRNA 的剪接，进而参与到花粉壁早期形成的调控过程。进一 步的研究结果表明，CDKG1 的 N 端含有 RS 基序，能够和其中的一个剪接因子 RSZ33 相互作用并通过其 RS 基序来完成适当的剪接调控。我们还找到一个可作 为调节亚基和 CDKG1 结合形成复合物并激发其激酶活性的周期蛋白，RCY1，RCY1 与 CDKG1 在酵母和植物细胞中亦存在相互作用。拟南芥 cdkg1 敲除突变体小孢 子败育，由此也导致了雄性育性严重下降。我们的研究表明，cdkg1 中 CalS5 前 体 mRNA 中的一个 GC-AG 类型的内含子(第六个内含子)的剪接出现异常，导致 CalS5 的成熟 mRNA 的水平剧烈下调，而 CalS5 是减数分裂细胞和四分体外围的 肼胝质的主要合成酶。RNA 免疫共沉淀实验显示 CDKG1 复合物能直接结合到 CalS5 的前体 mRNA 第六个内含子的附近并调控其剪接。由双突变 cdkg1/cals5-2 表型推测 CDKG1 可能还控制着其它花粉发育中起重要作用的基因。之后我们利 用 RNA-seq 技术，对 CDKG1 可能的作用位点进行预测，得出 CDKG1 对许多其他 基因具有选择性剪接作用，且 CDKG1 可能还调节另外一些 GC-AG 类型的内含子 的剪接，不仅验证了 CDKG1 能特异性调控 GC-AG 类型内含子的选择性剪接，结 果可能也蕴含着 CDKG1 潜在的其他功能和作用位点。本项研究结果表明，CDK 不仅在转录过程中，而且还在剪接过程中起着重要的调控作用，也丰富了 CDK 功能的多样性的知识。 关键词：关键词 ：：周期蛋白依赖的蛋白激酶;CalS5 前体 mRNA 剪接;RSZ33; 关键词关键词 ：： RCY1;RNA-seq 技术;GC-AG 型内含子 Abstract Cyclin-dependent kinase G1 belongs to a member of the family that was originally characterized as the cell cycle regulator. In this study, we report that CDKG1 in Arabidopsis thaliana regulates the pre-mRNA splicing of CalS5, and therefore involves in early pollen wall formation. CDKG1 which contains N-terminal Ser/Arg(RS) motifs can regulates proper splicing through the interaction with a splicing factor RSZ33. A cyclin RCY1 functioning as a regulatory subunit interacts with CDKG1 an