沉淀pH值对烟草Rubisco结晶的影响-中国烟草科学.PDF

沉淀pH值对烟草Rubisco结晶的影响 沉淀pH值对烟草Rubisco结晶的影响 张劲松 高学云 黄镇 方宇澄 ( 合肥经济技术学院 安徽 230052) 缓慢沉淀并形成晶体，沉淀速率与沉淀率虽低，但沉淀物复溶率高，结晶速率与结晶率高，对结晶时pH与离子强度的选择范围宽，有利 于晶体制备。沉淀过程中，pH5.4是Rubisco结晶制备的最佳pH值。 　　主题词 烟草 核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco) 沉淀pH 结晶 为一种可以大量获取的蛋白质，其结晶产物不含碳水化合物、脂类化合物和无机盐分，完全由氨基酸组成，有极高的纯度。它的必需氨基 的在于探讨烟草Rubisco沉淀过程中pH因素对其结晶的影响。 1材料与方法 　　1.1 植物与试剂 　　1.2 Rubisco提取处理 -1 -1 　　200g鲜叶，加含0.15mol·L NaCl和0.5%NaS O 的重蒸水200ml匀浆。4层纱布过滤。滤液以1.0 mol·L 2 2 5 其均分为5份。在4℃用6%HAc调pH5.0、5.1、5.2、5.3、5.4。每份取10ml，用于蛋白质含量测定。样品于4℃静置沉淀50h。 　　1.3 Rubisco复溶处理 -1 -1 　　4℃,6000rmp,离心10min，收集Rubisco沉淀。洗涤沉淀3次，每次20ml。以0.1 mol·L NaCl,0.01 mol·L 理15ml。4℃,12000rmp离心10min，除去不溶性物质。上清液用于紫外及可见光谱分析与结晶处理。 　　1.4 Rubisco结晶处理 -1 　　1.4.1 Rubisco上清液于4℃、pH7.5条件下稀释结晶。1份上清液加6份0.01 mol·L 量。 -1 　　1.4.2 Rubisco上清液于4℃、pH7.5条件下加不同量0.01 mol·L 响。 -1 　　1.4.3 将Rubisco上清液于(pH7.5)用0.20.01 mol·L -1 Tus-HCl溶液，混匀后静置60h。考察不同pH对结晶的影响。 1份Rubisco溶液加入6份相应pH的0.01 mol·L 　　1.5 蛋白质浓度测定 　　采用Bardford(1976)方法。以牛血清蛋白制作标准曲线。 file:///E|/中国烟草科学上网/1997/(2)/yckx1997(2)1.html（第 1／6 页）2009-7-9 13:37:39 沉淀pH值对烟草Rubisco结晶的影响 　　1.6 蛋白质纯度测定 -1 -1 Tus-HCl(pH7.5)，0.1 molNaCl溶液稀释至合适浓度，测定紫外吸收，以A·L /A 值表示蛋白质纯 　　沉淀复溶上清液以0.01 mol·L 280 260 度。 　　1.7 多酚类化合物沉淀