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蔬菜中敌百虫丙溴磷灭多威克百威-陕西食品药品监督管理局
蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、
敌敌畏残留的快速检测(KJ201710)
范围
本方法规定了蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测方法。
本方法适用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速测定。
酶抑制(率)法(分光光度法)
原理
在一定条件下,有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下,酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解,其水解产物与显色剂反应,产生黄色物质,用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值,计算出抑制率。
试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
试剂
丙酮(CH3COCH3)。
磷酸氢二钾(K2HPO4)。
磷酸二氢钾(KH2PO4)。
5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(C14H8N2O8S2)。
碳酸氢钠(NaHCO3)。
碘化乙酰硫代胆碱(?C7H16INOS)。
pH8.0缓冲溶液:分别称取11.9 g无水磷酸氢二钾及3.2 g磷酸二氢钾,溶解于1000 mL水中,混匀。
显色剂:分别取160 mg 5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和15.6 mg碳酸氢钠,用20 mL缓冲溶液溶解,4 ℃冰箱中保存。
底物:取125 mg碘化乙酰硫代胆碱,加15 mL蒸馏水溶解,摇匀后置于4 ℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。
乙酰胆碱酯酶:4 ℃冰箱中保存备用。
参考物质
3种有机磷和2种氨基甲酸酯类农药参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1,纯度均≥98%。
表1 有机磷和氨基甲酸酯类参考物质中文名称、英文名称、
CAS登录号、分子式、相对分子质量
序号 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 1 克百威 Carbofuran 1563-66-2 C12H15NO3 221.25 2 灭多威 Methomyl 59669-26-0 C5H10N2O2S 162.23 3 丙溴磷 profenofos ?41198-08-7 C11H15BrClO3PS 373.63 4 敌敌畏 Dichlorvos 62-73-7 C4H7Cl2O4P 220.98 5 敌百虫 Dipterex 52-68-6? C4H8Cl3O4P 257.44 标准溶液的配制
克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准储备液(1000 μg/mL):冷藏、避光、干燥条件下保存。
丙溴磷标准储备液(100 μg/mL):冷藏、避光、干燥条件下保存。
克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准中间液A(100 μg/mL):精密移取上述标准储备液(1000 μg/mL)(3.3.1)各1mL,分别置于10mL容量瓶中,用丙酮(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为100?μg/mL的标准液A。
克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫、丙溴磷标准中间液B(1 μg/mL):精密移取标准中间液A(100 μg/mL)(3.3.3)及丙溴磷标准储备液(100 μg/mL)(3.3.2)各1 mL,分别置于100 mL容量瓶中,用缓冲溶液(3.1.7)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1?μg/mL的标准中间液B。
仪器和设备
恒温水浴锅。
天平:感量为0.1 g。
分光光度计或相应商品化测定仪。
环境条件:温度15 ℃~35 ℃,湿度≤80%。
分析步骤
试样的提取
整株提取法
选取韭菜、芹菜有代表性的样品,擦去表面泥土,称取试样3 g(精确至0.1 g)置于表面皿中,加入10 mL缓冲液(3.1.7),残缺面不得接触缓冲液,轻轻振摇50 次,静置2 min以上,取上清液备用。
整体测定法
选取油菜、菠菜有代表性的样品,擦去表面泥土,剪成1 cm左右见方碎片,称取3 g(精确至0.1 g)放入离心管中,加入10 mL缓冲溶液(3.1.7),振摇50 次,静置2 min以上,倒出提取液,静置3 min~5 min,待用。
测定步骤
对照液的测定
先于反应管中加入3 mL缓冲溶液(3.1.7),再加入适量酶液、0.1 mL显色剂,摇匀后于37 ℃水浴锅中放置15 min。加入0.1 mL底物摇匀,立即测定吸光度,3min后再测定一次,记录反应3min的吸光度值的变化?A0。
样品液的测定
先于反应管中加入3 mL提取液,其他操作与对照液操作(5.2.1)相同,记录反应3 min的吸光度值的变化?At。
质控试验
每次测定应同时进行空白试验和加标质控试验。
空白试验
称取空白试样,按照5.1和5.2步骤与样品同法操作。
加标质控试验
韭菜、芹菜加标实验
取空白试样,擦去表面泥土,称取5份试样各3 g(精确至0.1 g)置于表面皿
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