电子显微镜与超薄切片技术.docVIP

电子显微镜与超薄切片技术 第一章 电子显微镜 电子显微镜的出现大大地推进了生物科学的研究，使生物科学从宏观到微观，从显微水平发展到超显微水平；将形态和组成，结构和功能逐渐地交融起来，使人们对细胞内的超显微结构及其功能得到进一步的认识。目前，电子显微镜已达到对物质元素构成的最小单位一一原子的分辨，在生物学、材料学、冶金学、考古学、地学和矿物学等学科占有极重要的地位。就生物学而论，电子显微镜及随之发展起来的电子显微技术，在细胞生物学、细胞化学、分子生物学、分子遗传学、分子免疫学、病毒学、微生物学、生物化学、生物医学等许多分支领域中起着不可忽视的，有时是决定性的作用。 电子显微镜，除了通常所指的透射电镜外，还发展了扫描电镜、高压电镜以适用于各种目的研究，但它们的结构大同小异，下面仅就透视电镜的结构及原理择要介绍。 第一节 透视电镜的结构 透视电镜的整体包括：电子光学系统，真空系统，供电系统（高压电源、透镜电源、控制电路、微机等电子学线路）、水冷却循环系统和压缩气流系统。 一、电子光学系统 电子光学系统又称镜筒，为电镜的主体结构。考虑到机械的稳定性，大都制成直立式的，镜筒是由照明系统、样品室、成像系统、观察记录系统等组成的。 1.照明系统 位于镜筒的最上端，由电子枪和二个磁透镜组成。电子枪的主要作用是发射电子束，它是由阴极、阳极和栅极组成的。阴极是电子的来源，它是一个直热式的钨灯丝，利用电流通过产生电子，阳极和栅极在高压（10万伏）和负高压（1～2千伏）的作用下将电子聚成一束很细的电子束。因此电子枪相当于光学显微镜的光源。磁透镜是由一只大的电磁线圈组成的。当电流通过线圈时，就会产生电磁场，当电子通过时，由于磁场作用使电子发生会聚作用。这样电子枪产生的电子束，在两个磁透镜的作用下，把它会聚成一个只有几微米大小的电子束斑，并使电子束斑具有足够的亮度。因此磁透镜具有聚“光”的作用，所以这两个磁透镜又称为聚光镜。 2.样品室 在聚光镜的下面，用来放置观察的物体。由于电子束只能穿透很薄的物体，所以样品要制得很薄，一般只有几百埃，当电子束穿过标本后，使电子束发生散射，这些散射的电子进入了电子显微镜的成像系统。 3.成像系统 由三个磁透镜组成。第一个是：物镜，对穿过标本后的散射电子进行第一次成像和放大；它直接决定电镜的分辨本领，对成像水平起关键性影响；第二个是中间镜，将成像的物体图像进行放大；第三个是投影镜，将物像进行第三次放大，并把放大了的图像投射到荧光屏上去。 4.观察记录系统 肉眼是不能直接看见电子射线所构成的像，必须将其转换成可见光的形式才易识到，这种转换是由观察室内的荧光屏来实现的，当快速运动的电子落在荧光屏上，激发荧光物质而发生光亮度，由于样品对电子的散射作用，落在屏上的电子分布不均匀性则造成荧光屏发光强度的不均匀分布（反差），即形成电子显微图像，在观察室内还安装了图像记录设备──照相装置，以把瞬息即失的电子显微图像记录下来。 二、真空系统 电子显微镜必须在高度的真空条件下进行工作，否则空气中的分子会阻挠电子束的发射而不能成像，阴极与阳极之间会放电，灯丝也会受到氧化或被阳离子轰击而减短寿命。所以在镜筒下面装有一套真空系统，它是由低真空抽气泵，高真空油扩散泵和电磁阀等组成的。 三、供电系统 电子显微镜为了获得高的分辨本领，要求供电系统稳定地供给电子枪、磁透镜所需要的高压和激磁电流，所以要有一套复杂的电子稳压、稳流电流。 第二节 透视电镜的成像原理 电镜是用波长比光波长短十几万倍的电子束作照明源，当电子枪的阴极发射电子，在高压加速场作用下，经聚光镜会聚成束，以高速射向薄样品。入射电子束和出射电子束对样品信息的传递过程主要由于入射电子与样品原子的散射机制，而使成像电子束（出射束）不均匀，相应于样品上质量密度高的区域，入射电子会被样品吸收，而出射束会是电子数不足或没有出射电子。反之，质量密度低的区域散射程度小，透过样品的电子多，这样一来，整个出射电子束经物镜折射放大，最后落到荧光屏上，即形成许多明暗程度不同的区域，它们反映了样品的结构信息。把荧光屏上亮度分布不均匀现象称反差，所获得的图像称为衬度像。 此外，为了提高像的清晰度，在物镜的中心，样品下方插入一支光束，称“物镜光阑”，由于它主要是用来提高反差的，又称“反差光阑”，光阑上的孔径有30、50、150微米三种，装成活动的，用一根光阑支架调节，以便根据实际需要进行选择。 第三节 电镜的分辨本领、放大倍数、反差及度量单位 研究物体“微细结构”最直观的方法，就是将物体“放大”、然后观察放大了的像，以便人肉眼觉察出更多的细节，像对物体的放大倍数就是显微镜的放大倍率。观察放大的像会改进人眼对物体的分辨能力，显然分辨与放大倍数是密切相关的。 分辨本领是衡量一台显微镜的性