甾体皂苷类成分提取分离方法.docVIP

甾体皂苷提取分离方法 　　甾体皂苷( steroidal saponins) 是天然产物中一类重要的化学成分,大多都具有一定的生理活性,在天然产物化学研究中日趋活跃。据不完全统计,超过90 个科的植物含有甾体皂苷,尤以单子叶植物的百合科、石蒜科、薯蓣科和龙舌兰 科等植物报道最多。由于含甾体皂苷成分的动植物药有相当的疗效。所以,人们在应用和研究方面越来越广泛。例如: Dracaena draco 被用于抗腹泻和止血[1] ,蒺藜用于治疗眼病、浮肿、腹胀、高血压、皮癣和气管炎[2], Chlorophytum malayense 对肿瘤有潜在的细胞毒活性[3], A gave americana有通便和利尿的作用[4], Solanum nigrum 在中国和日本用于对各种癌症的治疗[5],白首乌民间用于滋补药膳,是一种有前途的抗衰老药物[6],虎眼万年青民间用于抗肿瘤[7],西陵知母用于治疗烦热消渴,骨蒸劳热,肺热咳嗽等[8]。本文就甾体皂苷的提取分离方法做一简单综述。 甾体皂苷类化合物由于连有糖残基, 一般有较强的极性, 易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂, 不易溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂。甾体皂苷不易形成结晶（苷元例外）,且有时结构相似，给分离带来一定困难。甾体皂苷提取分离基本步骤为粗提、除杂、分离。 1、提取 目前, 实验室最常用不同浓度的工业乙醇或甲醇提取。也有用水作为溶剂的, 如:Jianying zhang 等用80 - 85℃ 的水从Anemarrhena asphodeloides 的根状茎中提取到六种甾体皂苷[9]。也可以先用氯仿、石油醚等强亲脂性溶剂处理中草药原料, 然后用乙醇为溶剂加热提取, 冷却提取液, 多数甾体皂苷由于难溶于冷乙醇而作为沉淀析出[10]。 2、除杂方法 无论是用水还是醇作为溶剂提取所得到的皂苷,多还包含许多杂质, 如无机盐、糖类、鞣质、色素等, 尚需要进一步精制。 2.1 液液萃取法 这是一种最普遍的皂苷除杂方法, 利用皂苷一般极性较大, 易溶于水而其中的一些杂质极性较小易溶于非极性溶剂的性质来去除一些脂溶性的杂质。一般的操作是将醇提取液减压浓缩得到的浸膏, 悬浮于水中, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行梯度萃取,甾体皂苷一般存在于正丁醇层, 减压回收正丁醇后得总皂苷。 2.2 沉淀法 在含甾体皂苷的甲醇或乙醇液中倒入大量的乙醚或丙酮, 可将皂苷类化合物沉淀出来。进一步利用过滤或离心的方法即得总皂苷, 反复利用这种沉淀法可达到初步纯化的效果。也可利用皂苷会与胆甾醇形成沉淀的特性进行初步纯化。皂苷溶于乙醇, 加胆甾醇的乙醇溶液沉淀,过滤, 沉淀干燥后置于索( soxhlex) 提取器中用苯回流, 不溶物为皂苷, 苯液浓缩后可回收胆甾醇。 2.3 吉拉德(Girard) 腙法 吉拉德试剂T 或P 在一定条件下, 可与含羰基的甾体皂苷元生成腙, 而与不含羰基的甾体皂苷元分离。通常先将粗甾体皂苷元溶于少量乙醇, 再加入吉拉德试剂T 或P, 并加乙酸使达10%的含量, 水浴加热或室温下放置后, 加水稀释, 加入乙醚萃取除去不含羰基的皂苷元, 在水相中加入盐酸使羰基皂苷元形成的吉拉德腙水解, 即可得原羰基皂苷元。 2.4 大孔吸附树脂法 大孔吸附树脂多为苯乙烯或2-甲基丙烯酸酯型, 理化性质稳定, 不溶于水、酸、碱及常用有机溶剂。根据其结构单元不同分为各种型号, 常用的如: D101型、DA- 201 型、Diaion HP- 20 型、AB- 8 型等[11]。舒孝顺等用大孔树脂分离菝葜总皂苷, 从HPD100、HPD300、HPD600、及D101 四种大孔树脂中筛选出HPD100 非极性树脂, 研究结果表明该树脂对于本体系中的总皂苷具有吸附快解吸较易、流体流动性能好、操作简单和周期短等优势[12]。在用大孔树脂获得较为精致的总皂苷后, 为进一步获得皂苷单体, 一般还需采用其他的色谱方法。 3、分离方法 甾体皂苷亲水性较强, 有些皂苷极性非常接近,以上述方法分离纯化, 难以获得单体化合物, 所以皂苷经过一定的纯化后, 常采用不同的色谱法分离甚至反复经过色谱法分离, 才能获得单体成分。总皂苷的分离主要是采用柱色谱技术。填料以硅胶为主,另外有葡聚糖凝胶(如Sephadex LH-20) ,烷基键合硅胶 (ODS) 等。Sephadex LH-20 适合于分子量相差大的化合物的分离,ODS 对极性大的化合物分离效果较好。在柱分离模式上, 有常压色谱、中压色谱(MPLC) 和高压色谱(HPLC) 。HPLC 法用于分离高极性、大分子量及结构相似的甾体皂苷有着突出的优点。 3.1 制备薄层层析法 方法与薄层层析相同, 只是增加薄层吸附剂厚度来增加其载药量,与柱层析相比,分离效果更好,能用来制备较纯的皂苷,但