通过氨基酸渗漏检测小麦种子活力的研究.pdfVIP

第16卷第2期 潍坊学院学报 VoL16No．2 2016年 4月 JournalofWeifangUniversity Apr．2016 通过氨基酸渗漏检测小麦种子活力的研究 刘春香，姬伟昌，王 萌 (山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室／潍坊学院，山东 潍坊 261061) 摘 要：本研究采用泰山22号和石麦2O号两个小麦品种，依据舍有氨基物质 (氨基酸、蛋白质、多肽) 与水合茚三酮共热产生蓝紫色化合物的原理，对茚三酮显色法是否适于小麦种子活力检测进行了研究。 分别对小麦净种子进行人工加速老化处理 0d、2d、4d、6d，以被处理小麦种子标准发芽试验得到的种子活 力指标(发芽指数、活力指数)作为种子活力的标准。将种子每孔 l粒置于96孔细胞培养板中25℃浸泡 6h，吸取50t~L种子渗出液于新96孔板中相应位置并加入 100t~L茚三酮反应试剂，80℃水浴反应30min， 用酶标仪记录 570nm吸光度值，与老化处理种子的标准发芽试验各项种子活力指标比较。结果表明两个 品种小麦种子活力指标与茚三酮显色法测定的吸光度均呈极显著负相 关，相关系数在一0．9837～一 0．9988之间，将吸光度大于1．0的蓝色孔比例与种子活力指标进行相关分析，其相关系数在一0．9739～ -- 0．9999之间，达到极显著，说明依据氨基酸渗漏的茚三酮显色法可以用于小麦种子活力的快速、非破坏 检测 。 关键词：小麦；种子活力；茚三酮；氨基酸 中图分类号：$330 文献标志码 ：A 文章编号：1671--4288(2016)02--0001--05 种子活力与作物的产量息息相关_1]，高活力种子是农业获得高产的基础。种子活力与生物膜的结构 和功能密切相关，活力高的种子，膜结构比较完整，在吸水时，膜系统恢复的速度较快，并且修复得较完 善[2]。劣变种子的膜受损、透性增强，种子内含物外渗量增大[3]。国际种子检验协会 (ISTA)推荐的种子 活力检测方法有电导率法和加速老化法_l4]。其中电导率法依据膜透性变化的原理，检验对象为外渗的电 解质。种子浸泡后的外渗物质成分复杂，含有各种离子、可溶性糖、氨基酸等_5]，种子含水量低于20—30 时，生物膜磷脂的排列方向发生逆转，因此膜维持不了连续界面，即吸胀过程中在膜完整性修复之前，大量 内含物外渗，活力不同，修复能力不同，外渗量的多少与持续时间长短也不同_6]。有关氨基酸浓度与膜透 性的相关性在蓝茎冰草种子 、紫花苜蓿种子[、水稻种子[引、苦楝树种子[。]及大多数蔬菜种子已有报导 证实[∞]。TaiGiMin等 2013年报导利用种子浸出液氨基酸含量的变化可以快速测定萝 卜种子的活 力 。 小麦种子是典型的常规种子，其种子劣变同样存在膜的损伤。陈振德认为小麦浸出液的电导、可溶性 糖浓度和氨基酸浓度与发芽指数和活力指数之间呈极显著负相关_1。本研究 旨在探索通过种子浸出液 中氨基酸含量的变化，利用茚三酮与氨基酸特有的颜色反应来探索该方法是否可成为小麦种子活力检测 的新方法，为种子活力的快速非破坏检测提供借鉴。 1 材料与方法 1．1 主要实验材料、仪器及药品 小麦品种泰山22号、石麦 2O号种子，购 自潍坊市种子销售点，为2013年 6月生产。水合茚三酮、无 水乙醇为国产分析纯。酶标仪 (伯乐公司，MODEL680型)、智能恒温光照培养箱GTOP一500B、种子老 化箱(LH一80，浙江托普仪器有限公司)。 * 收稿 日期 ：2O16一O2一O8 基金项 目：山东省应用基础研究提升计划(2O14ZRBO1AAC)，山东省星火计划(2O1OXHO62O) 作者简介：刘春香(1974一)，女，黑龙江望奎人，潍坊学院生物与农业工程学院副教授 ，博士。研究方向：植物育种与 种子活力研究。 ～ 1 ～ 潍坊学院学报 1．2 茚三酮显色剂的配制 准确称量 2g水合茚三酮至烧杯中，用少量95 乙醇溶解，加入80mg氯化亚锡和适量蒸馏水，搅拌过 滤，用蒸馏水定容到 100mL，静置过夜，存放于棕色试剂瓶