高分子微球固定化脂肪酶的合成研究.pdfVIP

第2卷第2期 南 阳 理 工 学 院 学 报 VoI-2No．2 2010年 3月 JOURNAL OF NANYANG INSTITUTE OF TECHNOLOGY Mar． 2010 文章编号 ：1674—5132(2010)02—0069—05 高分子微球 固定化脂肪酶的合成研究 马 宁，李云强，黄达伟 (南阳市质量技术监督局 河南 南阳 453000) 摘 要 ：本实验采用悬浮聚合法制备苯 乙烯一二乙烯苯一马来酸酐(st—DVB—cBA)三元共 聚高分子微球 (0．26～ O．33inn)，并用其作为脂肪酶的载体 ，进行脂肪酶的固定化 。实验结果表明，制备 固定化脂肪酶的相对最佳条件 ： 脂肪酶加入量 2．0mg，载体 50mg，反应温度 30~C，反应时间6h，pH=7．0，最高固载率可达80．02％，酶活4150U／g 载体。所制得的酶最佳催化条件 ：反应温度40℃，pH=7．38。 关键词 ：高分子微球 ；脂肪酶 ；固定化 中图分类号 ：TQ031．2 文献标识码 ：A 脂肪酶的最佳工艺条件 ，并对其酶学性质进行探讨。 0 前言 l 材料与仪器 脂肪酶又称三酰基甘油酰基水解酶… ，可以催 化甘油三酯的合成和分解 ，普遍存在于动植物和微 (1)试剂 生物中，是一种专一 、高效的生物催化剂。它能在油 无水硫酸钠 、氢氧化钠 、无水乙醇、过氧化苯 甲 水界面上催化酯进行水解 、醇解 、酯合成 、酯交换 、内 酰、苯乙烯 、二乙烯苯 、明胶 、顺丁烯二酸酐 、聚乙烯 酯合成及立体异构拆分等有机合成反应。 醇、磷酸二氢钾 、95％乙醇、氢氧化钾 、考马斯亮蓝 固定 化酶 是 在 1971年 美 国 HennikerNew G250、85％磷酸、磷酸氢二钠 (十二水)、磷酸二氢 Hampshire举行 的酶工程会议上首次提 出的，定义 钠 (二水)均为分析纯 ，购 自洛 阳市化学试剂厂 ；橄 为用物理或化学方法把酶固定在空间的一个特定区 榄油购 自佐罗蒙特有 限公 司；脂肪酶 (Lipozyme 域以保存酶 的催化活性并且可 以重复和连续使 IM)、牛血清 白蛋 白购 白天津市科密欧化学试剂开 用 。早在 20世纪90年代末 ，13本大坂科技研究 发 中心。 所 (OsakaMunicipalTechnicalResearchInstitute)对 (2)仪器设备 ， 固定化脂肪酶催化转酯化植物油脂做 了大量研究 ， 101—2s电热恒温鼓风干燥箱 (上海路达实验 并进行了初步工业化设计。利用丹麦诺维信 (No． 仪器有限公司)；HH—S恒温水浴锅 (巩义市英峪予 vozymes)公司生产 的固定化假丝酵母脂肪酶 No． 华仪器厂)；CS501A恒温槽 (重庆银河实验仪器有 vozym435，Y．Shimada等成功利用三步法 (即每次 限公司)；8l一2调温磁力搅拌器 (上海司乐仪器 分别加入 1／3计量的甲醇)在 30℃下反应48h，转 厂)；BS110S电子分析天平 (北京赛多利斯天平有 化率达到了97．3％。他们还发现，甲醇在三酰基甘 限公司)；722S可见分光光度计 (上海精密仪器有限 油与脂肪酸甲酯的混合体系中，其溶解性要优于其 公司)；sHA—c水浴恒温振荡器 (金 山市华峰仪器 在纯三酰基甘油体系 中的，这样可在第一步反应后 有限公司)；IR—Prest唔e一21红外仪 (岛津公司)； 将剩余的甲醇一次加入 ，使得三步法简化成两步法 ， A一88组织捣碎匀浆机 (江苏金坛医疗仪器厂)。 反应 36h后转化率达到