DNA经弱酸1M的HCL水解.PPT

4、Schiff液黑暗条件下染色30-50min（避光:因为生成不稳定的物质，见光很容易分解）。 5、用新配制的亚硫酸氢钠溶液洗3次，每次约5min。（洗去无色品红，在自然条件下易还原为碱性品红） 6、用清水洗2次，每次2min。 7、取一根尖置于载玻片上，切下生长区部位（染成紫红色），加一滴清水或4.5%醋酸水溶液，加盖玻片，轻压。 8、镜检：细胞内DNA的部位呈紫红色。 9、绘图 水解是本实验成败关键之一。水解时间和温度一定要合适，如果温度过高或时间过长，造成水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，都不能呈现颜色反应。 用Schiff试剂染色前，蒸馏水的残留不宜过多，否则会使染色剂浓度降低。 漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前临时配制，以便保持较浓的SO2。 加盖玻片时，切勿用力过大。 『实验原理』 DNA经弱酸（1M的HCL）水解，其上的嘌呤碱和脱氧 核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛 基，这些醛基在原位与Schiff试剂（无色品红亚硫酸 溶液）反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA 的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应 产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具 有颜色。 『实验内容和方法』 Feulgen反应的一般步骤： 1、材料准备：取一洋葱鳞茎，置于盛满水的小烧杯上使其长出新根。待根尖长2cm左右时，于上午9时剪下根尖用Carnoy固定液固定、保存。（固定的目的是防止细胞死后变化，保持胞内固有结构与状态） 2、水解：从冰箱取出预先准备好的洋葱根尖，用清水洗3次，每次2min，换1M HCl洗一次，倾去，换入预热60℃的1M HCl，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解8-15min（视材料而定）。 3、吸去热1M HCl，换入冷1M HCl洗一次，用蒸馏水漂洗3次，每次2min。 『思考题』 欲得到一张好的Feulgen反应制片，制片过程 中应注意些什么？ 『其他固定液』 Flemming固定液：1%铬酸水溶液 25ml，1%冰醋酸（用前加入）10ml，蒸馏水 60ml Champy固定液：3%重铬酸钾 70ml，1%铬酸 70ml，2%锇酸 40ml Bouin固定液：苦味酸饱和液（1.22%）75ml，福尔马林 25ml，冰醋酸 5ml （此试验不宜使用） Carnoy固定液：3份95%酒精加入1份冰醋酸。固定显示DNA、RNA的效果好 自从1924年Feulgen等人建立了DNA-Feulgen染色方法以来，至今这种方法仍是DNA定量测定的主要染色方法之一。Feulgen染色是经典显示去氧核糖核酸的方法。 Schiff 试剂，中文全称为：品红醛试剂，主要用于生物学实验中鉴定DNA的存在。 Schiff 试剂，中文全称为：品红醛试剂，主要用于生物学实验中鉴定DNA的存在。