一株沿海滩涂细菌的降油及生长特性研究.pdfVIP

第27卷第4期 大连海洋大学学报 Vol，27No．4 1 OFDALIANOCEANUNIVERSnY 202年8月 JOURNAL Aug．2012 一株沿海滩涂细菌的降油及生长特性研究 王斌1、一，周雅飞1，张兴1，郑峰伟1，高钰婷1，何洁1，周一兵1、2 (1．大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室，iT_宁大连116023；2．大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境 修复重点实验室，if_宁大连116023) 摘要：采用以原油为唯一碳源的基础培养基，从原油污染的沿海滩涂土壤中分离筛选具有降油性能的细 菌；采用柴油培养基测定分离菌株对柴油的原始降解率；通过在柴油培养基中添加不同浓度的葡萄糖(0、 g／L) 1、2、4、8、16∥L)，及不同浓度的酵母膏、蛋白胨、尿素、硫酸铵(以氮计，浓度为0．5、1、2 和磷酸二氢钠(0、4、8、12 e,／L)后，测定分离菌株的降油性能；鉴定分离菌株并研究其生长特性。结果 表明：共分离到5株能以原油为唯一碳源生长的细菌，其中l株原始降油率最高(19．0％)，编号为Y-3； 在添加1g／L以上葡萄糖时，Y一3菌株降油率升高，添加4g／L葡萄糖时达最高(79．9％)；酵母膏和蛋白 胨可提高Y一3菌株的降油率，尿素、硫酸铵稻磷酸盐对降油率影响不明显；根据形态学、生理生化鉴定以 及16SrDNA序列分析，确定Y一3菌株为恶臭假单胞菌Pseudomonas putida，Y-3菌株的最适生长温度为30 ℃，最适生长pH为8，适宜生长NaCl浓度为0—30∥L。 关键词：石油降解菌；生理生化鉴定；t6SrDNA序列分析；生长特性 中图分类号：X172 文献标志码：A 海上溢油事故的不断发生导致海洋环境的石油 染的滩涂，24h内带回实验室进行细菌分离。原 类污染成为世界性的问题，由此造成了部分海湾环 油样品采自盘锦油田，柴油样品为市售0号柴油。 境恶化、生物绝迹¨’2J。石油污染常用的修复方法 1．1．2培养基基础无机盐培养基包含NaCllO 0．5 0．5 I 有物理、化学和生物修复，其中生物修复对人和环 g，NH4C1g，KH2P04g，KsHP04g，KCl O0．5 0．002 境造成的影响小且修复费用仅为物理、化学修复的 0．019，MgS04·7H2g，CaCl2 g， 30％一50％【3 J。目前，国内外对微生物降解石油的 FeSO。0．01g，蒸馏水1L，pH为7。2，在t21℃ min。分离富集培养基为100 研究非常广泛，应用于海洋溢油的降解菌也有较多 下高压蒸汽灭菌20 mL基础无机盐培养基中加入2 报道[4。8]。在修复环境中接种的外源微生物面临多 g原油，在121℃ 重压力：一是土著微生物的竞争作用，二是环境中 下高压蒸汽灭菌20rain。生长特性及菌种保存培养 生态因子的适宜性，三是被修复环境中污染物的环 基为营养琼脂斜面(或平板)和牛肉膏蛋白胨液体 境毒性。由于这几方面的压力使接种的外源微生物 培养基。柴油培养基为100mL灭