DAPT对耐雷帕霉素骨肉瘤细胞增殖、凋亡影响.pdfVIP

第 44卷第 6期第 640页 华中科技大学学报 (医学版) Vo1．44 No．6 P．640 2015年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2O15 DAPT．对耐雷帕霉素骨肉瘤细胞增殖、 凋亡的影响* 张 聃 ， 刘 冲， 王 军， 田 强， 张广平， 詹新立△ 广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科，南宁 530021 摘要 ：目的 通过研究 分泌酶抑制剂 (DAPT)对耐雷帕霉素 (RAPA)骨 肉瘤细胞株增殖、凋亡 的影 响，探讨 mTOR通路与Notch通路在骨肉瘤细胞增殖、凋亡中的关系。方法 体外培养骨肉瘤 MG63细胞株及建立耐雷帕霉素 骨肉瘤 MG63细胞株 ；噻唑蓝 (MTT)比色法测定不 同剂量雷帕霉素及 DAPT对各细胞株增殖 的影响；流式细胞仪检测 不同剂量药物对各细胞株凋亡的影响；Westernblot法检测各细胞株中p53的表达 。结果 MTT法检测显示雷帕霉素 及 DAPT均能抑制各细胞株的增殖。流式细胞术检测结果表明雷帕霉素及DAPT均能诱导各细胞株发生凋亡 ，MG63 细胞早、晚期凋亡率均与药物作用剂量呈正 比，耐雷帕霉素 MG63细胞仅在高浓度药物作用下，早、晚期凋亡率与细胞正 常凋亡率相 比差异有统计学意义 。Westernblot检测结果显示 ，不 同浓度雷帕霉素、DAPT作用下，MG63细胞 p53表达 量随药物浓度升高而增加 ，而耐雷帕霉素 MG63细胞 p53表达量未随药物浓度升高而增加 。结论 雷帕霉素、DAPT对 MG63细胞及耐雷帕霉素 MG63细胞均能抑制增殖 、促进凋亡 。二者均可能是通过促进 p53蛋白表达而发挥凋亡效应 。 凋亡过程中阻断mTOR后可能会降低骨肉瘤细胞对DAPT的敏感性，同时抑制 Notch通路与p53的协同作用。 关键词 ：雷帕霉素 ； 7-分泌酶抑制剂 ； 骨肉瘤 ； p53 中图分类号：R738．1 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2015．06．005 EffectofDAPT on theProliferationandApoptosisofRapamycin-resistant OsteosarcomaCells ZhangDan，LiuChong，WangJunetal DepartmentofSpineandOrthopedicSurgery，TheFirstAffiliatedHospitalof GuangxiM edicalUniversity，Nanning530021，China Abstract Objective Toexaminetheeffectsofthe7-secretaseinhibitor(DAPT)ontheproliferationandapoptosisofrapa— mycin(RAPA)一resistantosteosareomacells，andprobeintotherelationshipbetweenthemT0R pathwayandtheNotchpathway intheproliferationandapoptosisofosteosarcomacells．Methods 0steosarcomacellsMG63wereculturedinvitroandRAPA- resistantcellswereestablished．Themethylthiazolyltetrazolium (MTT)assayandflow cytometrywereusedtodetecttheeffects ofdifferentconcentrati0nsofIAPA and DAPT on theproliferation and apoptosis ofnormaland RAPA-resistantM