1-2基因工程基本操作程序.pptVIP

获取目的基因（5种） 构建基因表达载体（5部分）——核心 将目的基因导入受体细胞（5种） ——转化 目的基因的检测与鉴定 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 四、目的基因的检测与鉴定 2、鉴定 ① 抗性鉴定 是否表达抗性 抗性表达程度 ② 功能活性鉴定 与天然产品比较 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 小 结 Company Logo * Company Logo Add Your Company Slogan 选修三 第 1 专题 基 因 工 程 基因工程 原核细胞的基因结构 RNA聚合酶结合位点 编 码 区 非编码区 （能够转录mRNA，能够编码蛋白质） （不能转录mRNA，不能编码蛋白质） 启动子 终止子 位置 功能 (编码区上游) (引导RNA聚合酶的正确结合) 位置 功能 (编码区下游) (阻碍RNA聚合酶移动并使其脱离 ) 基因工程 真核细胞的基因结构 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 编 码 区 非编码区 （间隔的、不连续的） （不能转录mRNA，不能编码蛋白质的区段） 启动子 终止子 位置 功能 位置 功能 外显子 内含子 （编码区中能够编码蛋白质的序列） （编码区中不能够编码蛋白质的序列 ） 基因工程 相同 不同 真核细胞 原核细胞 编码区连续 编码区间隔、不连续 能够编码蛋白质的编码区 + 具有调控作用的非编码区 启动子与起始密码 终止子与终止密码 原核细胞的基因转录 基因工程 转 录 mRNA 翻 译 多肽 蛋白质 真核细胞的基因转录 基因工程 转 录 前体mRNA 翻 译 多肽 蛋白质 成熟mRNA 基因工程 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 主要是指编码蛋白质的基因。 1、概念 从自然界已有物种中分离： 鸟枪法 人工合成基因： 反转录法、化学合成法 2、方法 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (1) 鸟枪法 限制性核酸内切酶 切割 供体细胞的DNA成许多片段 运载体 分别转入不同的受体细胞 供体细胞的DNA所有片段分别大量复制 找出含目的基因的细胞， 再分离相应DNA片段 应用 散弹射击法 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (2) 反转录法 目的基因 的mRNA 反转录酶 RNA—DNA的杂合双链 核酸酶H 单链的 DNA (cDNA) DNA聚合酶 双链的 DNA (目的基因) 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (3) 化学合成法 根据已知蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 DNA合成仪 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (4) 从基因文库中获取 基因文库(gene library)：将含有某种生物不同基因 的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个 受体菌分别含有这种生物的不同的基因。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 ：包含一种生物的所有基因 ：包含一种生物的部分基因 cDNA文库 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (4) 从基因文库中获取 ① 基因组文库的构建 全部基因：编码区和非编码区 ——鸟枪法 ② cDNA文库的构建 ——反转录法 部分基因：外显子(真核)、编码区(原核) 得到的cDNA + 运载体 → 受体细胞 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (4) 从基因文库中获取 依据目的基因的有关信息获取目的基因 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (5) 利用PCR技术扩增 ① 概念：聚合酶链式反应。在生物体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术。 ② 原理： DNA半保留复制。 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (5) 利用PCR技术扩增 ⑤ 方式： ④ 原料： 4种脱氧核苷酸、 TaqDNA聚合酶 以2n指数方式扩增(n为扩增循环的次数) ⑥ 结果： 短时间内大量扩增目的基因 ③ 条件： 一段已知目的基因的核苷酸序列；引物。 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程 §1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 2、方法 (5) 利用PCR技术扩增 ⑦ 过程： a. 变性(90℃-95℃)：双链DNA模板在高温作用下，氢键断裂，形成单链DNA。