氨基葡萄糖的发酵中试放大和提取工艺研究.pdf

摘要 摘 要 氨基葡萄糖（Glucosamine, 2-amino-2-deoxy-D-glucose ）也被称为氨基葡糖、葡萄糖 氨或葡糖氨，是葡萄糖六个羟基中的其中一个羟基被氨基取代了的化合物。氨基葡萄糖 广泛存在于自然界中，其中以虾、贝壳等甲壳类动物的几丁质中最为丰富。另外，作为 一种生理必须物质，在人体结缔组织中也有存在，而且是人体软骨基质中合成蛋白聚糖 [6] 所必需的重要成分 。由于氨基葡萄糖用途十分广泛，市场前景广阔，有越来越多的研 究者投入到氨基葡萄糖的研究中。 本论文以本研究室已经构建好的一株可以生产 N-乙酰氨基葡萄糖的工程菌— E. coli-glmS-gna1-ΔnagE-ΔmanX 为发酵生产菌株，在已经得到发酵小试最优工艺条件的 基础上，对发酵工艺进行了中试放大的研究，另外，对氨基葡萄糖的下游提取工艺也进 行了研究，主要得到的研究结果是： (1) E. coli-glmS-gna1-ΔnagE-ΔmanX 可以在胞外积累 N-乙酰氨基葡萄糖，在 7 L 罐 小试和 100 L 罐中试放大研究中，比较了不控制溶氧水平和分阶段控制溶氧水平的发酵 结果。研究发现分阶段控制溶氧更有利于产品的积累。其中，7 L 罐产量达到 120 g/L， 100 L 罐产量达到 60 g/L，与不控制溶氧的发酵工艺相比，7 L 罐产量提高了 37.93%， 100 L 罐的产量提高了 13.20%。 (2) 5 t 罐分阶段控制溶氧水平同比例放大的发酵中试研究，与相同工艺条件下的 100 L罐发酵相比，pH 降速最快的时间延后了2 h ，菌浓对数期时间缩短约2 h ，菌体在发 酵10 h进入稳定期，N-乙酰氨基葡萄糖的产量在发酵12 h达到最高28 g/L ，降低幅度明显 变小，可见，大规模的放大有利于产量的维持，这对工业化生产氨基葡萄糖具有重要意 义。 (3) 研究了以重组大肠杆菌的发酵液为原料，用离子交换法分离提取发酵液中的氨 基葡萄糖的工艺。静态实验研究了苯乙烯系强酸性阳离子交换树脂 001×8 吸附氨基葡萄 糖的最优工艺条件，确定最优工艺条件为：缓冲液 pH 2.2 ，温度 30 oC，洗脱液 0.7 mol/L 的硫酸铵溶液。 (4) 动态实验研究了苯乙烯系强酸性阳离子交换树脂 001×8 吸附氨基葡萄糖的动力 学性质，确定最优工艺条件为：层析柱 Ф1 cm ×10 cm，进样量 19.2 mL，进样流速 3.19 BV/h ，洗脱流速 3.8 BV/h，在此工艺条件下，吸附率为 95%，洗脱率达到 98.35% 。 关键词：氨基葡萄糖，E. coli-glmS-gna1-ΔnagE-ΔmanX ，发酵放大，提取 I Abstract Abstract Glucosamine, also called amino glucose or glucose ammonia, is compound that one amino replaces one hydroxyl of glucose. Glucosamine is widely distributed in nature, there are rich glucosamine in chitin of shrimp, shellfish etc. In addition, as one of the important compounds of human being, glucosamine also distributes in human connective tissues, and it is important component for human cartilage matrix synthesis proteoglycan. Because of the widespread use and wide market foreground, more and more researche