猪伪狂犬病病毒野毒与基因缺失疫苗株鉴别检测方法的建立及应用.pdf

中文摘要 猪伪狂犬病病毒野毒与基因缺失疫苗株鉴别检测方法的建立及应用 以本实验室分离保存的 PRV SA 强毒株，根据 GenBank 中伪狂犬病病毒全 基因组序列设计了 9 对引物，扩增出目的基因，并将目的基因分别与 T 载体连 接转化，挑取阳性菌落摇菌。分别进行 PCR 、单酶切和双酶切三种方法对阳性 克隆进行了鉴定。成功克隆目的基因 gI 、gE 、gD 、gG 、28k 基因。对所得序列 进行 Blastn 分析，并递交到 DDBJ/EMBL/GenBank 数据库中，登录号分别为 AB440240 （gG ）、AB440243 （gE ）、AB440295 （gI ）和AB44024 （Tk ）。 针对 gI 、gE 、28K 、TK 四个基因序列特异性位点，利用5 条引物对强毒株 SA 株、gI- - / gE /PRV SA 双基因缺失株和 Bartha K61 疫苗株进行了 扩增，得到 2061bp 、1323 bp、801bp 和 963bp 特异性目的条带。Bartha K61 疫苗株基因组 检测最小浓度为 136pg/μL 。建立了针对野毒和两种疫苗株的 PCR